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晨靄微涼金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
連續(xù)復(fù)蘇了幾種細(xì)胞都死亡了，大家?guī)兔Ψ治鱿略虬�，謝謝 已有6人參與
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| 不知道什么原因，最近實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)的細(xì)胞狀態(tài)都不是很好，其他師姐的細(xì)胞狀態(tài)也不好。然后我已經(jīng)把細(xì)胞房、孵箱打掃消毒，培養(yǎng)基也重配了，最近復(fù)蘇的細(xì)胞（一年前凍存的）還是死了，沒(méi)有明顯的染菌現(xiàn)象。不知道什么原因，請(qǐng)問(wèn)大家有沒(méi)遇到這種狀況，怎么解決?謝謝！ |
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 細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
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具體原因還真不好說(shuō)。按理來(lái)說(shuō)，細(xì)胞全部死亡很少見(jiàn)。我解凍3年前的細(xì)胞都沒(méi)什么問(wèn)題。有可能你之前冷凍的方法有失誤導(dǎo)致細(xì)胞冷凍的時(shí)候就死了。你回憶一下，同一批次冷凍的細(xì)胞，以前解凍的時(shí)候是否發(fā)生死亡現(xiàn)象，如果以前沒(méi)有發(fā)生，那就排除冷凍時(shí)照成細(xì)胞的死亡。如果實(shí)驗(yàn)室不干凈的話，可能照成細(xì)胞污染，但你說(shuō)沒(méi)有污染跡象，說(shuō)明細(xì)胞還是在解凍及培養(yǎng)方面有問(wèn)題，一般解凍沒(méi)什么大問(wèn)題。好好檢查培養(yǎng)液，是不是個(gè)別藥品過(guò)期了，或是血清更換了，還是其他原因。 有時(shí)候?qū)嶒?yàn)就這樣，一段時(shí)間不明原因的不好，過(guò)了這段時(shí)間又好了起來(lái)。很奇怪的。 |
2樓2014-07-11 15:40:02
j1234555jhh
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【答案】應(yīng)助回帖
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凍存細(xì)胞復(fù)蘇不成功，1.是否凍存于液氮，2.凍存液的配置是否有問(wèn)題，3.凍存時(shí)細(xì)胞的活力是否最佳。 細(xì)胞在-70度冰箱中貌似只能保存一年時(shí)間，凍存液的比例是培養(yǎng)基（含血清）：DMSO=9:1，細(xì)胞活力在細(xì)胞長(zhǎng)至70%-80%時(shí)最佳。 |
3樓2014-07-11 16:35:08
4樓2014-07-12 00:30:50
yinhl623
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血清、培養(yǎng)基是否和原來(lái)的同廠家或同批次？純水機(jī)有沒(méi)出問(wèn)題？培養(yǎng)基的pH是否合適？有沒(méi)在孵箱內(nèi)加水盤(pán)？孵箱的溫度、濕度、二氧化碳濃度調(diào)節(jié)功能是否正常？細(xì)胞房旁邊有沒(méi)有進(jìn)行涉及揮發(fā)性很大的有毒化學(xué)試劑的實(shí)驗(yàn)？ 建議：首先檢查培養(yǎng)基、血清是否過(guò)期，然后檢查去離子水的電阻等值（純水機(jī)上有顯示），再檢查孵箱功能調(diào)節(jié)是否正常，然后找同學(xué)借一瓶傳代后尚未長(zhǎng)滿的細(xì)胞，用你新配的培養(yǎng)基養(yǎng)1~2天看下細(xì)胞有沒(méi)異常，若異常，很可能是你的培養(yǎng)基或血清有問(wèn)題（原料、水、pH都有可能），依次排查；若細(xì)胞無(wú)異常，建議將此種細(xì)胞按你以前的步驟凍存，隔天后即可按你的原來(lái)的步驟進(jìn)行復(fù)蘇，看細(xì)胞有無(wú)問(wèn)題；若有問(wèn)題，換DMSO或者反思自己的凍存、復(fù)蘇步驟是否有問(wèn)題；若無(wú)問(wèn)題，找個(gè)人幫你復(fù)蘇你以前的細(xì)胞；逐步排查肯定能找到問(wèn)題癥結(jié)。 |
5樓2014-07-12 01:37:16
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6樓2014-07-12 16:31:10
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7樓2014-07-14 09:00:49
liuzhenhai
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8樓2014-07-14 09:31:46
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9樓2014-07-15 11:15:47
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