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暮云深

金蟲 (小有名氣)

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專業(yè): 臨床分子生物學(xué)檢驗

[求助] Tunel細(xì)胞實驗求助

各位老師，我是第一次做tunel實驗，有些問題請教一下。
下面是我做細(xì)胞tunel實驗的過程，有不對的地方希望老師們指正。
一.細(xì)胞爬片的制作
1.預(yù)先將高壓滅菌的蓋玻片放入6孔板中（問題1.我想每個組做二個片子，這里把蓋玻片剪成二半，對后續(xù)的操作有影響嗎？
                                                               問題2.我準(zhǔn)備將蓋玻片放入6孔板中后先加入1mL的明膠潤一下，然后用注射器棄去多余的明膠，大家有沒有這么做過？                                                                                                 度                                                                      那明膠的濃度老師們有人知道嗎？明膠是為了增強細(xì)胞爬片的）
2.將第二代軟骨細(xì)胞用胰蛋白酶消化,制成密度為10的5次方/ml的細(xì)胞懸液。每孔1mL細(xì)胞懸液滴加于蓋玻片上。含血清培養(yǎng)基培養(yǎng)24h后吸棄培養(yǎng)基，用PBS洗二遍后加上無血清的含有不同藥物濃度的培養(yǎng)基作用24h后。收集蓋片,4%多聚甲醛固定,存放。
                                                            （問題1.這里可以存放嗎？我需要把我的蓋玻片拿到其他地方做，在此步停頓可以嗎？如果不行，還望老師推薦個時間點）
二。把固定好的玻片帶到其他實驗室，按試劑盒操作。
            老師們做Tunel有什么心得體會和注意點還望提點我一下。
                                                               (問題低級,還望見諒)

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1樓 2014-07-17 13:03:39

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