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[求助]
Tunel細胞實驗求助
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各位老師,我是第一次做tunel實驗,有些問題請教一下。 下面是我做細胞tunel實驗的過程,有不對的地方希望老師們指正。 一.細胞爬片的制作 1.預先將高壓滅菌的蓋玻片放入6孔板中( 問題1.我想每個組做二個片子,這里把蓋玻片剪成二半,對后續(xù)的操作有影響嗎? 問題2.我準備將蓋玻片放入6孔板中后先加入1mL的明膠潤一下,然后用注射器棄去多余的明膠,大家有沒有這么做過? 度 那明膠的濃度老師們有人知道嗎?明膠是為了增強細胞爬片的) 2.將第二代軟骨細胞用胰蛋白酶消化,制成密度為10的5次方/ml的細胞懸液。每孔1mL細胞懸液滴加于蓋玻片上。含血清培養(yǎng)基培養(yǎng)24h后吸棄培養(yǎng)基,用PBS洗二遍后加上無血清的含有不同藥物濃度的培養(yǎng)基作用24h后。收集蓋片,4%多聚甲醛固定,存放。 (問題1.這里可以存放嗎?我需要把我的蓋玻片拿到其他地方做,在此步停頓可以嗎?如果不行,還望老師推薦個時間點) 二。把固定好的玻片帶到其他實驗室,按試劑盒操作。 老師們做Tunel有什么心得體會和注意點還望提點我一下。 (問題低級,還望見諒) |
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