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石小木新蟲 (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于血液游離氨基酸測定，重復(fù)非常不好。
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哪位高手用氨基酸自動分析儀測過血液游離氨基酸的，請教。 本人測量不同飼喂處理大鼠的血液游離氨基酸水平，用的是日立8900的氨基酸自動分析儀，每種飼喂處理有10個生物學(xué)重復(fù)（只老鼠），但相同處理老鼠血清樣本測得的游離氨基酸水平差異很大：這里摘錄5個同處理組樣本，總游離氨基酸(一通道+二通道，單位nmol/20ul)分別是：76.731, 48.929, 45.422，91.027， 95.495 。 1、請問懂得血液生理的高手，是不是不同老鼠血液游離氨基酸水平就是差這么大��？ 2、樣品處理方式如下：斷頭取血，當(dāng)天離心血樣（3000g,15min）,吸取上層血清凍存。吸取血清樣品50ul置于1.5ml離心管，加入150uL 50g/L的磺基水楊酸沉淀蛋白，20000r/m轉(zhuǎn)離心10分鐘，離心后用1ml針管吸取上清，過0.22um濾膜過濾，濾液注入到150ul的進(jìn)樣瓶內(nèi)插管中，用于游離氨基酸的分析。樣品制備方法是否有錯？ 3、使用了上樣品中加內(nèi)插管上揚(yáng)，內(nèi)插管150ul,高度到達(dá)樣品瓶中間的刻度線，進(jìn)樣針，被工程師向上調(diào)整了4mm,說是防止觸到內(nèi)插管底，在操作軟件系統(tǒng)中可以看出，同組的峰型，峰高、面積基本一致，但出來的結(jié)果很不一致， 4、檢測的是：P-Ser磷酸絲氨酸、Tau�；撬帷EA磷酸乙醇胺、Urea尿素、Asp天冬氨酸、Thr蘇氨基、Ser絲氨酸、Glu谷氨酸、α-AAAα-氨基乙二酸、Gly甘氨酸、Cit瓜氨酸、Ala丙氨酸、α-ABAα-氨基丁酸、Val纈氨酸、Cys半胱氨酸、Met蛋氨酸、Cysthi胱硫醚、Ile異亮氨酸、Leu亮氨酸、Tyr酪氨酸、Phe苯丙氨酸、β-Alaβ-丙氨酸、β-AiBAβ-氨基異丁酸、g-ABAγ-氨基丁酸、EOHNH2乙醇胺、Hylys羥賴氨酸、Orn鳥氨酸、Lys賴氨酸、1Mehis1-甲基組氨酸、His組氨酸、3Mehis3-甲基組氨酸、Car肌肽、Arg精氨酸、Hypro羥脯氨酸、Pro脯氨酸，共35 種游離氨基酸的含量。 樣品多數(shù)不含有：α-AAAα-氨基乙二酸、sar肌氨酸、Car肌肽、Ans鵝肌肽。其他氨基酸峰型都很好。 5、相同處理組樣品在操作軟件結(jié)果峰型演示中擬合度都很好，尤其是tau完全重合,但越向后，過了NH3的峰只后，擬合度就很差了（Arg lys）等。這跟系統(tǒng)有沒有什么關(guān)系？ 6、峰圖中，谷氨酸和他臨近的一個峰總是分不開，不知是是什么東西？（見附件圖片） 謝謝了。 處理D編號11的樣品一通道峰圖.jpg |
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2樓2018-05-06 22:21:08
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