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wait429銀蟲 (初入文壇)
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[求助]
測定PTP1B 的活性,底物是PTP1B,但是一直沒有吸收
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自己是藥化專業(yè)的,最近想測自己合成的化合物對PTP1B 的抑制活性,用的是酶標法。 從sigma買來了PTP1B, 底物PNPP 因為不是那么穩(wěn)定, 所以也是在sigma上買了配好的溶液。 PTP1B 儲存液的pH 是7.2 hepes 緩沖液, 根據(jù)文獻,所以我選擇了PH 7.0 的mops工作液。 sigma給的PNPP 的說明書上說,溶液的PH是8.80~9.20,使用方法,是用200ul的溶液。我也照著用了。 最后反應(yīng)體系是400ul。但是按照文獻做了,也試了和文獻接近的幾個蛋白梯度,在405nm的吸光度還是非常低。感覺像是底物沒有分解。 求助: 是因為我的PNPP 溶液的PH 太高? 那如果買來PNPP 片,按照說明也還是需要配成堿性溶液,那我該怎么配?還是說直接用工作液把它溶解了? 如果不是底物的問題,是不是我的蛋白濃度太低了? 那篇文獻說了試驗中最終的蛋白濃度是5ng/100ul,但是買蛋白的時候包裝都是20ug 和50ug的,所以我在懷疑是不是文獻里的蛋白濃度寫錯了? 初生牛犢,問的問題可能有些無知,還望大神指導(dǎo)! |
銀蟲 (初入文壇)

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