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wait429銀蟲 (初入文壇)
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[求助]
測(cè)定PTP1B 的活性，底物是PTP1B，但是一直沒有吸收
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自己是藥化專業(yè)的，最近想測(cè)自己合成的化合物對(duì)PTP1B 的抑制活性，用的是酶標(biāo)法。 從sigma買來了PTP1B， 底物PNPP 因?yàn)椴皇悄敲捶�(wěn)定， 所以也是在sigma上買了配好的溶液。 PTP1B 儲(chǔ)存液的pH 是7.2 hepes 緩沖液， 根據(jù)文獻(xiàn)，所以我選擇了PH 7.0 的mops工作液。 sigma給的PNPP 的說明書上說，溶液的PH是8.80~9.20，使用方法，是用200ul的溶液。我也照著用了。 最后反應(yīng)體系是400ul。但是按照文獻(xiàn)做了，也試了和文獻(xiàn)接近的幾個(gè)蛋白梯度，在405nm的吸光度還是非常低。感覺像是底物沒有分解。 求助： 是因?yàn)槲业腜NPP 溶液的PH 太高？ 那如果買來PNPP 片，按照說明也還是需要配成堿性溶液，那我該怎么配？還是說直接用工作液把它溶解了？ 如果不是底物的問題，是不是我的蛋白濃度太低了？ 那篇文獻(xiàn)說了試驗(yàn)中最終的蛋白濃度是5ng/100ul，但是買蛋白的時(shí)候包裝都是20ug 和50ug的，所以我在懷疑是不是文獻(xiàn)里的蛋白濃度寫錯(cuò)了？ 初生牛犢，問的問題可能有些無知，還望大神指導(dǎo)��！ |
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很是糾結(jié)==
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4樓2018-07-26 21:44:30
wangmiao8674
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2樓2015-12-21 13:51:08
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3樓2018-04-20 15:12:05
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