 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 克隆問題
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 868 | 回復: 7 | |||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
博克儂浮碼銀蟲 (小有名氣)
|
[求助]
克隆問題 已有6人參與
|
||
| 想請教前輩們一個問題，就是克隆的時候用的是單酶切，質粒和目的片段都用同一種酶切開，連接也連接上了，但是卻怎么都不表達，請問有沒有可能是連接后目的片段的復制方向和質粒的復制方向相反，也就是目的片段的啟動子和質粒復制時的啟動子方向相反導致不表達，如果真是這種情況，該怎樣做才能讓他們的啟動子方向一致，請前輩們多多賜教 |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經有161人回復
-
蛋白質檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經有0人回復
-
納米粒度分析
已經有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經有0人回復
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+4, 鼓勵回帖交流！ 2014-07-28 20:16:46
博克儂浮碼: 金幣+3, ★★★★★最佳答案 2014-07-30 10:40:00
感謝參與，應助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+4, 鼓勵回帖交流！ 2014-07-28 20:16:46
博克儂浮碼: 金幣+3, ★★★★★最佳答案 2014-07-30 10:40:00
|
自然是有可能。你可以用定向PCR來試一下，不用浪費測序的錢，而且也很迅速。最好是在涂板之后挑多個單菌落做，如果已經提了質粒，也可以用質粒做模板。當然要多測幾個，因為理論上連接正確的概率是50%，考慮載體自連的話正確率要比這個低得多。 做PCR的引物組合有兩種：1. 載體上游引物+目的基因下游引物；2. 目的基因上游引物+載體下游引物。 這樣子，只有當你基因片段的閱讀順序和載體同向才可以得到PCR產物，反向的話就無法擴增。之后把能擴增的提質粒送去測序吧，不測序實在是不靠譜的。 |
7樓2014-07-28 19:42:51
ssssllllnnnn 
至尊木蟲 (知名作家)
Translator and Proofreader
- 應助: 452 (碩士)
- 金幣: 31580.9
- 紅花: 100
- 帖子: 7681
- 在線: 19966.6小時
- 蟲號: 3328089
- 注冊: 2014-07-17
- 專業(yè): 腫瘤發(fā)生
2樓2014-07-28 10:46:55
zhaozhibozhi
金蟲 (正式寫手)
- 應助: 112 (高中生)
- 金幣: 1512.3
- 散金: 5
- 紅花: 11
- 帖子: 480
- 在線: 444.9小時
- 蟲號: 1763195
- 注冊: 2012-04-18
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物病理學
3樓2014-07-28 11:48:46
songzuowei
木蟲 (著名寫手)
- 應助: 88 (初中生)
- 金幣: 2666.2
- 散金: 18
- 紅花: 7
- 帖子: 2058
- 在線: 98.5小時
- 蟲號: 2469387
- 注冊: 2013-05-17
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結構與功能
4樓2014-07-28 14:37:01
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 306求調劑 +4 | 來好運來來來 2026-03-22 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 考研調劑 +4 | 來好運來來來 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
 一志愿070300浙大化學358分，求調劑！
+3
|
酥酥魚.. 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 384求調劑 +3 | 子系博 2026-03-22 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 生物學一志愿985，分數(shù)349求調劑 +4 | zxts12 2026-03-21 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 化學工程321分求調劑 +18 | 大米飯！ 2026-03-15 | 22/1100 |
|
|
|
[考研] 313求調劑 +4 | 肆叁貳壹22 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 307求調劑 +3 | 余意卿 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 265求調劑 +3 | Jack?k?y 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 301求調劑 +10 | yy要上岸呀 2026-03-17 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 化學求調劑 +4 | 臨澤境llllll 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 294求調劑材料與化工專碩 +15 | 陌の森林 2026-03-18 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 材料學求調劑 +4 | Stella_Yao 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿 南京航空航天大學大學 ，080500材料科學與工程學碩 +5 | @taotao 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿吉林大學材料學碩321求調劑 +11 | Ymlll 2026-03-18 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 344求調劑 +6 | knight344 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考博] 26博士申請 +3 | 1042136743 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 有沒有道鐵/土木的想調劑南林，給自己招師弟中～ +3 | TqlXswl 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 070300化學學碩求調劑 +6 | 太想進步了0608 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0856求調劑 +3 | 劉夢微 2026-03-15 | 3/150 |
|