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[求助]
重組蛋白分離純化 已有1人參與
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| 我的重組蛋白帶有GST標(biāo)簽，第一次做純化的時(shí)候很順利的得到了目的蛋白，但是在做第二遍的時(shí)候加了2-巰基乙醇，蛋白是掛在柱子上了，但是又洗不下來(lái)了，增大GSH的濃度也不起作用，兩次不同之處是：第一次做的時(shí)候破碎以及平衡洗脫緩沖液用的都是pbs，第二次做的時(shí)候破碎用的pbs+2-巰基乙醇，平衡液與破碎液一樣，洗雜及洗脫液用的是50mM Tris-HCl，150mM NaCl，2mM DTT。我想問(wèn)下2-巰基乙醇和DTT對(duì)GST柱子的洗脫有影響嗎？哪位大俠知道這是什么原因？2-巰基乙醇和DTT使用的濃度范圍是多少？謝謝啦 |
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2樓2014-07-31 11:10:46
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