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dongjiqiao鐵桿木蟲 (著名寫手)
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[求助]
陰離子DEAE純化酶，洗脫峰毛刺兒，洗脫后還有毛刺兒，希望得到中間條帶的樣品 已有2人參與
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如圖，希望得到如電泳中9號(hào)樣品中的條帶，但是它是在穿透峰后期出現(xiàn)的，在我的洗脫峰前期（31號(hào)）也是這樣的樣品，上樣緩沖液：pH 7.0 Tris-Hcl 0.02M+Nacl 0.02M ,洗脫緩沖液pH 7.0 Tris-Hcl 0.02M+Nacl 1.0 M,梯度洗脫，請(qǐng)問(wèn)，什么辦法能夠得到我想要的目的條帶，另：上樣緩沖液中添加一定的鹽，影響不大吧，本人新手，我是問(wèn)了負(fù)責(zé)儀器的老師，他說(shuō)可以少加點(diǎn)，減少疏水作用。緩沖液沒(méi)有抽濾脫氣，超聲10min。謝謝大神們指教！ IMG_0510.JPG |
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2014-07-30 10:05:01, 1.98 M
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3樓2014-07-30 16:44:35
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【答案】應(yīng)助回帖
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| 我覺(jué)得很奇怪，你都還沒(méi)有開始洗脫，就有兩個(gè)大峰出來(lái)了，洗脫的過(guò)程中反而沒(méi)有什么峰。而且你的程序?yàn)槭裁丛O(shè)定用洗脫緩沖液洗脫的時(shí)間占了程序時(shí)間的一半？當(dāng)然，層析所用的任何液體都是要用0.45微米的濾膜抽濾除去固體顆粒的，以免堵塞填料和其它。紫外燈的問(wèn)題反而不要緊，因?yàn)榫同F(xiàn)在的圖看來(lái)還是可以滿足需求的。 |
6樓2014-07-30 17:53:18
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8樓2014-07-31 20:23:55
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