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清逸凌風(fēng)金蟲 (小有名氣)
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[求助]
質(zhì)粒提取問題，都快1個(gè)月了，求解決了啊？ 已有4人參與
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將別人給的質(zhì)粒 （不知道抗性、序列，只知道里面有我需要的目的基因片段�？剐缘拇_定我是分別把轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞分別涂到含有A、C、K的平板上，結(jié)果A和K的板子長(zhǎng)了，然后轉(zhuǎn)點(diǎn)到A+K的平板上，也長(zhǎng)了，提取質(zhì)粒。）導(dǎo)入DH5@中進(jìn)行擴(kuò)展，然后用質(zhì)粒提取試劑盒提取質(zhì)粒（試劑盒沒有問題，實(shí)驗(yàn)室別人都能正常提取出來），濃度大概在100ng/ul左右。 下一步就是驗(yàn)證，將別人給的質(zhì)粒和自己提取的質(zhì)粒進(jìn)行電泳驗(yàn)證，結(jié)果如下： 分析：明顯我提取出來的質(zhì)粒和別人給的質(zhì)粒結(jié)果差別很大 我的問題：是否這個(gè)質(zhì)粒不適宜DH5@菌株里面擴(kuò)增，還有最上面的條帶是什么？基因組？RNA？為什么我把純質(zhì)粒導(dǎo)進(jìn)去，提出來成這樣了，按理說質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化效率還是很高的啊。 為了進(jìn)一步驗(yàn)證我接下來有了單酶切3h兩個(gè)質(zhì)粒，跑膠，結(jié)果如下： marker后Lane1:別人的質(zhì)粒單酶切結(jié)果 Lane2：自己的質(zhì)粒酶切 綜上：我的困惑時(shí)怎么樣擴(kuò)增別人的質(zhì)粒，樣品越來越少了，都快1個(gè)月，各種糾結(jié)啊，有沒有大神也遇到這樣的問題，求解決啊，金幣多多的？ 質(zhì)粒跑膠圖 酶切結(jié)果圖 |
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清逸凌風(fēng)
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2樓2014-07-30 15:47:00
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4樓2014-07-30 16:23:17
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5樓2014-07-30 19:44:58
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7樓2014-07-31 12:26:26
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
清逸凌風(fēng)(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-08-01 10:35:08
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清逸凌風(fēng)(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-08-01 10:35:08
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你們用試劑盒提的質(zhì)粒效果都有模糊，不是很好。 你現(xiàn)在的目的是為了得到你的目的片段，不是為了大批量擴(kuò)增體質(zhì)，因?yàn)槟慵词箶U(kuò)的再多再好，也沒用。因?yàn)槟悴恢浪麅啥说拿盖形稽c(diǎn)，而且對(duì)你不一定用得上。 個(gè)人建議同6.7樓，趕緊設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增出來繼續(xù)做你的實(shí)驗(yàn)，不然就真浪費(fèi)時(shí)間了，不要走入了誤區(qū)。 |
8樓2014-07-31 15:45:31
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