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電泳結(jié)果如此讓人淚奔，下一步該如何做呢？ 已有7人參與
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這是做的濃度梯度，me2+濃度梯度，還有引物濃度梯度，，結(jié)果還是如此，下一步怎么讓人做下去啊 jh 2014-08-01 15 小時(shí) 49 分鐘.jpg |
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【答案】應(yīng)助回帖
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夢(mèng)飄雪: 金幣+30, ★有幫助, 親，雖效果不好。但還是要謝謝你呢！ 2014-08-04 15:31:01
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看體系，沒啥大毛病，dNTP稍微有點(diǎn)兒高，4微終濃度1mM，一般終濃度0.2mM 左右。可以試著降低一點(diǎn)兒加1微左右試試，因?yàn)閐NTP濃度太高PCR也會(huì)出不來，mg2+的話 根據(jù)TOYOBO的建議終濃度在1.5mM，可以先做下dNTP降低濃度的，然后再試試降低mg，primer 差不多，就這樣，還有就是反應(yīng)條件了，退火溫度也可以做梯度，50-60，以前我做乙肝病毒DNA時(shí)做過這個(gè)范圍，再有循環(huán)數(shù)，30，35，40，或更高，都可以嘗試�；蛘�，你可以看看你們實(shí)驗(yàn)室其他人有沒有已經(jīng)擴(kuò)增出來的基因組，借過來用你的反應(yīng)條件看看能不能擴(kuò)出來，對(duì)比下，如果出來了，就是你基因組問題，如果沒出來，看看兩者反應(yīng)體系條件的區(qū)別再做調(diào)整。祝早日成功！ |
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夢(mèng)飄雪4樓2014-08-01 20:06:35
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