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有關(guān)茚三酮測氨基酸的一些問題請教 已有2人參與
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本人最近在做茚三酮測氨基酸實驗，所測氨基酸是來自昆蟲體內(nèi)的，用過兩種方法提取①10%的乙酸勻漿，②95%的乙醇勻漿。最后提取出來的提取液和茚三酮水浴加熱都顯色。 但需要解決的問題是，①在沸水浴加熱過程中（15min)，反應(yīng)產(chǎn)生的二氧化碳和氨氣非常劇烈，加塞后液體依然嘣的到處都是，有時還會把玻璃塞直接頂出，我也經(jīng)常被嘣的滿身茚三酮紫紫的，之后每個試管中加入沸石依然嘣的很厲害，想知道大家是如何解決這個問題的？ ②還有水浴后顏色很濃，用60%的乙醇稀釋后依然顏色很深，分光光度測出來的數(shù)據(jù)沒有什么曲線，很郁悶，想問下大家這個怎么解決？還有水浴后蒸發(fā)很嚴重，有些試管中的液體根本不夠測OD值。 加一個本人的實驗步驟，若有錯誤，希望大家能告知。 0.05g蟲粉+0.5ml10%乙酸（或95%乙醇）勻漿，勻漿液轉(zhuǎn)移到10ml離心管中，用7ml超純水沖洗勻漿器，沖洗液一并轉(zhuǎn)移到離心管中進行混勻，并于6000r/min,離心10min后取上清定容至10ml，吸取定溶液1ml，放入20ml戴塞試管中，加1ml超純水，加0.1ml 0.1%的抗壞血酸溶液和3ml茚三酮試劑，570nm比色。 2%茚三酮 :2g茚三酮加入100ml無水乙醇。 麻煩做過這個實驗有經(jīng)驗的大神們多多給點指導啊  |
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