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小木蟲論壇-學術(shù)科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 層析/純化 » 分離寡糖和多肽
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zhouxianglzy新蟲 (小有名氣)
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[求助]
分離寡糖和多肽 已有2人參與
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| 怎么樣分離滅活的多肽和寡糖的混合物，二者分子量都在4000D 左右 C18柱可以嗎？ |
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jiangdaohang
禁蟲 (著名寫手)
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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2樓2014-08-08 21:27:55
好朋友的祝福
木蟲 (正式寫手)
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3樓2014-08-11 09:36:31
凌波麗
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【答案】應(yīng)助回帖
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zhouxianglzy: 金幣+10 2014-09-10 16:58:53
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zhouxianglzy: 金幣+10 2014-09-10 16:58:53
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C18柱是反相柱，是由非極性的18碳烷基鏈通過硅烷化反應(yīng)共價結(jié)合到硅膠（多孔微粒硅膠）上，構(gòu)成固定相。 一般分辨率還比較高，可以試試，分離不出來也不會損失樣品。如果體積比較大，可以先上離子交換層析柱。 注意：一般的反相柱的流動相的極性比較大，否則，樣品分子的疏水面不能與多孔微粒硅膠上的非極性的18碳烷基側(cè)鏈（疏水鏈）以疏水相互作用而結(jié)合到一起，但是流動相的選擇要注意一般不要用酸性流動相，因為硅膠很溶解于酸中，另外要考慮多肽和寡糖對于酸堿性的承受能力，不好把握，可以用梯度加大中性鹽的濃度的方式來操作，洗脫使用疏水洗脫試劑（比如咪唑等）。因為現(xiàn)在的 C18反相柱的液相層析的實驗指導基本上都是搞化工的分離有機小分子背景的研究者寫的，他們設(shè)計流動相時許多時候沒有考慮到生物分子的特性。 |
4樓2014-08-11 12:21:55
zhouxianglzy
新蟲 (小有名氣)
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5樓2014-09-18 18:00:20
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