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zhouxianglzy新蟲 (小有名氣)
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[求助]
分離寡糖和多肽 已有2人參與
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| 怎么樣分離滅活的多肽和寡糖的混合物，二者分子量都在4000D 左右 C18柱可以嗎？ |
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jiangdaohang
禁蟲 (著名寫手)
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2樓2014-08-08 21:27:55
好朋友的祝福
木蟲 (正式寫手)
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3樓2014-08-11 09:36:31
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【答案】應(yīng)助回帖
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C18柱是反相柱，是由非極性的18碳烷基鏈通過硅烷化反應(yīng)共價(jià)結(jié)合到硅膠（多孔微粒硅膠）上，構(gòu)成固定相。 一般分辨率還比較高，可以試試，分離不出來(lái)也不會(huì)損失樣品。如果體積比較大，可以先上離子交換層析柱。 注意：一般的反相柱的流動(dòng)相的極性比較大，否則，樣品分子的疏水面不能與多孔微粒硅膠上的非極性的18碳烷基側(cè)鏈（疏水鏈）以疏水相互作用而結(jié)合到一起，但是流動(dòng)相的選擇要注意一般不要用酸性流動(dòng)相，因?yàn)楣枘z很溶解于酸中，另外要考慮多肽和寡糖對(duì)于酸堿性的承受能力，不好把握，可以用梯度加大中性鹽的濃度的方式來(lái)操作，洗脫使用疏水洗脫試劑（比如咪唑等）。因?yàn)楝F(xiàn)在的 C18反相柱的液相層析的實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)基本上都是搞化工的分離有機(jī)小分子背景的研究者寫的，他們?cè)O(shè)計(jì)流動(dòng)相時(shí)許多時(shí)候沒有考慮到生物分子的特性。 |
4樓2014-08-11 12:21:55
zhouxianglzy
新蟲 (小有名氣)
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5樓2014-09-18 18:00:20
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