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western小白求助-內(nèi)參相關(guān) 已有4人參與
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本人第一次做western，還在摸索中，希望有經(jīng)驗的蟲友幫忙： 關(guān)于內(nèi)參的使用方法（本人可以查到的）如下，選哪種方法更合理和保險呢，希望大神幫忙。 ①同時跑兩個膠，一個轉(zhuǎn)膜后，用來孵育目標蛋白抗體；另一個轉(zhuǎn)膜后，用來孵育內(nèi)參抗體。 ②跑一個膠，轉(zhuǎn)膜后，先孵育目標蛋白抗體。然后，直接孵育內(nèi)參抗體。 ③現(xiàn)在有專門的抗體去除液，可以實現(xiàn)用同一個膜：孵育完目標蛋白抗體，并顯色；用去除液去除抗體，再孵育內(nèi)參抗體，顯色。 注：我的目標蛋白是一種細胞膜蛋白，分子量有好多個27,43,47,67,55,117KDa；內(nèi)參用的是GAPDH（37KDa） 另外，我想定性我的目標蛋白，這需要在轉(zhuǎn)完膜后將膜染色，然后跟蛋白Marker對比嗎？還是到發(fā)光那一步，目標條帶和Marker都會跑到X光片上？ |
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