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sakura01_22木蟲 (小有名氣)
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[求助]
蛋白質(zhì)相互作用研究 蛋白A能pull-down蛋白B 反之檢測不出
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| 如題，在蛋白質(zhì)相互作用研究中，IP檢測，蛋白A能拉下蛋白B，但是蛋白B IP蛋白A時，檢測不出。重復(fù)3遍左右，依然檢測不出，希望哪位蟲友能幫忙解答一下。是否存在相互作用只能單方面pull-down的情況，這種情況如何解釋？ |
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jurkat.1640
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6樓2014-08-18 18:42:31
dingchaoyue
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sakura01_22: 金幣+2 2014-08-19 10:34:46
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可否用pull-down的方法嚴重一下b是否可以拉下a？你的那種情況我們組里面有人也出現(xiàn)過那種情況，后來用純化蛋白用pull down方法解決的，而不是用抗體。當然，還有可能那兩蛋白不互作，有a拉b的假陽性。 蛋白互作能否用bifc方法來試試？ [ 發(fā)自小木蟲客戶端 ] |
2樓2014-08-17 11:48:47
ssssllllnnnn 
至尊木蟲 (知名作家)
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sakura01_22: 金幣+2 2014-08-19 10:34:54
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這種情況雖然少見，但卻是可以出現(xiàn)的。具體到你的情況： 1、確證用A之抗體Co-IP B的真實性，具體說要有對照（同種屬的control IgG對照）。 2、另選一種或幾種B的抗體試一試。許多抗體并非適于IP實驗，這時只能另選可能用的其他抗體。 3、用其他方法驗證A-B間的相互作用（physical interaction），如GST pulldown assays等。 4、可以用mammalian two-hybrid assay在功能上（functional interaction）研究A-B間的相互作用。 Good luck！ |
3樓2014-08-17 12:11:30
sakura01_22
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4樓2014-08-18 16:50:35
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