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| 今天在做WB，把一個(gè)分子量很小的蛋白和一個(gè)分子量很大的蛋白放在一塊膠上了，被別人說(shuō)不能放一起，問(wèn)了也沒(méi)說(shuō)為什么，請(qǐng)問(wèn)各位會(huì)有什么樣的影響，是會(huì)對(duì)轉(zhuǎn)膜有影響么？謝謝謝~~~~ |
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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這要看這兩個(gè)蛋白到底差別有多大。如果一個(gè)十幾KD的蛋白和300KD的蛋白同時(shí)在一塊叫上跑膠、轉(zhuǎn)膜，可能就有些問(wèn)題： 1、膠濃度選擇問(wèn)題：大蛋白（如超過(guò)300KD者）需要低濃度的膠，而小蛋白（如11kd的蛋白）則最好在較高濃度的膠上跑。差別太大時(shí)二者不好協(xié)調(diào)（梯度膠也不合適）。 2、跑膠時(shí)間：其實(shí)與1是一類(lèi)問(wèn)題，大蛋白需要跑很長(zhǎng)時(shí)間才進(jìn)入膠中，而此時(shí)小蛋白可以都跑出去了。 3、轉(zhuǎn)膜：很是這個(gè)問(wèn)題，就是轉(zhuǎn)膜的時(shí)間的控制問(wèn)題，大蛋白需要較長(zhǎng)時(shí)間可能都轉(zhuǎn)的不完全，而很小的蛋白則有可能被轉(zhuǎn)跑掉了（大蛋白時(shí)transfer buffer中甲醇濃度可以降低些）。 這是主要的問(wèn)題。所以具體要看你的兩種蛋白差別到底有多少，在一定范圍內(nèi)是可以同時(shí)做的（如一種蛋白在200kd一下，另一種在20kd左右等仍然可以同時(shí)做）。 |
2樓2014-08-19 07:49:47
3樓2014-08-19 21:11:26
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4樓2014-08-19 21:13:55
5樓2014-08-19 21:27:05
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