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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 蛋白電泳/WB » WB
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[求助]
WB 已有1人參與
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| 今天在做WB，把一個分子量很小的蛋白和一個分子量很大的蛋白放在一塊膠上了，被別人說不能放一起，問了也沒說為什么，請問各位會有什么樣的影響，是會對轉膜有影響么？謝謝謝~~~~ |
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【答案】應助回帖
感謝參與，應助指數(shù) +1
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這要看這兩個蛋白到底差別有多大。如果一個十幾KD的蛋白和300KD的蛋白同時在一塊叫上跑膠、轉膜，可能就有些問題： 1、膠濃度選擇問題：大蛋白（如超過300KD者）需要低濃度的膠，而小蛋白（如11kd的蛋白）則最好在較高濃度的膠上跑。差別太大時二者不好協(xié)調（梯度膠也不合適）。 2、跑膠時間：其實與1是一類問題，大蛋白需要跑很長時間才進入膠中，而此時小蛋白可以都跑出去了。 3、轉膜：很是這個問題，就是轉膜的時間的控制問題，大蛋白需要較長時間可能都轉的不完全，而很小的蛋白則有可能被轉跑掉了（大蛋白時transfer buffer中甲醇濃度可以降低些）。 這是主要的問題。所以具體要看你的兩種蛋白差別到底有多少，在一定范圍內是可以同時做的（如一種蛋白在200kd一下，另一種在20kd左右等仍然可以同時做）。 |
2樓2014-08-19 07:49:47
3樓2014-08-19 21:11:26
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4樓2014-08-19 21:13:55
5樓2014-08-19 21:27:05
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