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zhangxiwu123新蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
求助！雙酶切驗(yàn)證總切出來(lái)四條帶，請(qǐng)親們幫忙看看，非常著急啊！謝謝大家了！ 已有6人參與
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本人近期在構(gòu)建原核表達(dá)載體，用的是pET-32a載體，BamHI和Xhol酶切位點(diǎn)（在軟件上搜索過(guò)了，目的基因不含這兩個(gè)酶切位點(diǎn)），連接、轉(zhuǎn)化好后，菌液PCR鑒定均未陽(yáng)性，但是酶切，不論切1h,2h,3h，一直都是四條帶，奇怪的很。麻煩大家?guī)臀铱纯词窃趺椿厥履兀恐x謝大家了！ 下面是電泳圖，1（目的基因1000bp左右）、3 （目的基因300左右）泳道是重組質(zhì)粒雙酶切的結(jié)果，2,4泳道是沒(méi)被酶切的重組質(zhì)粒。Marker不小心點(diǎn)錯(cuò)了，點(diǎn)成600的了。 93585E02CF1B31AAB0EC2CAA368D37C8.jpg |
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11樓2014-08-22 22:06:08
zhangxiwu123
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2樓2014-08-22 09:28:26
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你的質(zhì)粒，切了和不切的，大小幾乎一樣的。 而且，你的1應(yīng)該是目的條帶300吧，怎么看都不會(huì)是1000啊。 如果自己不能確定載體有沒(méi)有這兩個(gè)酶切位點(diǎn)，那你把原始載體切了看看。 最后，重新制備載體，片段，重新做。一定要酶切完全。 |
3樓2014-08-22 10:21:34
zhangxiwu123
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7樓2014-08-22 15:35:02
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8樓2014-08-22 15:43:44
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9樓2014-08-22 15:49:49
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