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關于培養(yǎng)基和內(nèi)生菌分離 的問題 吡咯喹啉醌PQQ 已有1人參與
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關于一篇“甲醇利用型產(chǎn)生吡咯喹啉醌PQQ的內(nèi)生菌分離的文章”,求高手解答 文章在附件 |
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最近一直在研究一篇關于“甲醇利用型產(chǎn)生吡咯喹啉醌PQQ的內(nèi)生菌分離的文章”,有個問題真是不懂。在網(wǎng)上也查不到好的方法,求高手解答一下 內(nèi)生細菌被成功分離后,先用2種培養(yǎng)基進行培養(yǎng): 完全培養(yǎng)基:蛋白胨 10 g,NaCl 5 g,H2O 1000 mL,pH 7.0[68]。 基本培養(yǎng)基:(NH4)2HPO4 3 g,K2HPO4 2 g,NaCl 1 g,煙酸 20 μg,VBl 10 μg,VB2 20 μg,泛酸鈣 20 μg,吡哆醇 20 g,生物素10 μg,對氨基苯甲酸10 μg,MgSO4·7H2O,0.2 g,F(xiàn)eS04·7H2O 10 mg,H2O 1000 mL,MnSO4·H2O 5 mg[68] “PQQ 產(chǎn)生菌的初篩 將供試菌株接種于裝有10 mL 1%無水甲醇的基本培養(yǎng)基和1%無水甲醇的完全培養(yǎng)基的 50 mL 發(fā)酵管中,28℃、180 r/min 搖床培養(yǎng) 7 d,觀察菌體生長情況,選擇發(fā)酵液顏色由清澈變?yōu)榧t色的菌株! 這一步就是初步鑒定此菌可以產(chǎn)出PQQ,但是為什么要用兩個培養(yǎng)基呢?一個不就已經(jīng)夠了??他所說的變成紅色,應該是兩個培養(yǎng)液都能變成紅色的才是合格的? 再進行復篩: “挑取初篩菌株的單菌落,接入裝有 10 mL MPQ 培養(yǎng)基的發(fā)酵管中,28℃、180 r/min,振蕩培養(yǎng) 72 h,然后將全部培養(yǎng)液倒入裝有 50 mL MPQ 培養(yǎng)基的三角瓶中,28℃、180r/min 振蕩培養(yǎng) 7 d。 真空抽濾器抽濾棄菌體,上清液加入 3 倍體積的無水甲醇置于 4℃冰箱過夜,10 000r/min 離心 20 min 取上清,pH 調(diào)至 3.5。 MPQ 培養(yǎng)基:MgSO4 1.5 g,(NH4)2SO4 3 g,KH2PO4 1.4 g,Na2HPO4 3 g,檸檬酸鐵 30 mg,CaCl2·2H2O 30 mg,MnCl2·4H2O 0.5 mg,ZnSO4·7H2O 5 mg,CuSO4·5H2O 0.5mg,H2O 1000 mL! 隨后就用HPLC進行PQQ值得測定。 不明白為什么換成這個培養(yǎng)基了,怎么不用基本培養(yǎng)基呢?這兩個有什么區(qū)別? “真空抽濾器抽濾棄菌體,”然后又加入“上清液加入 3 倍體積的無水甲醇置于 4℃冰箱過夜”, 這步還是發(fā)酵啊,怎么把菌體去掉了,濾紙過濾不了微生物,發(fā)酵液繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng),去菌體的目的是為了HPLC做準備??? 謝謝大家。。~~~ 那篇文章已在附件 |
金蟲 (小有名氣)

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