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[交流]
關于培養(yǎng)基和內生菌分離 的問題 吡咯喹啉醌PQQ 已有1人參與
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關于一篇“甲醇利用型產(chǎn)生吡咯喹啉醌PQQ的內生菌分離的文章”，求高手解答 文章在附件 |
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本內容由用戶自主發(fā)布，如果其內容涉及到知識產(chǎn)權問題，其責任在于用戶本人，如對版權有異議，請聯(lián)系郵箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : 甲醇利用型吡咯喹啉醌產(chǎn)生菌的篩選及鑒定.pdf
- 附件 2 : 59種藥用植物內生菌的分離、鑒定及PQQ產(chǎn)生菌的篩選.pdf
2014-08-26 19:46:59, 1.39 M
2014-08-26 19:48:22, 1.83 M
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3樓2014-09-29 10:12:03
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最近一直在研究一篇關于“甲醇利用型產(chǎn)生吡咯喹啉醌PQQ的內生菌分離的文章”，有個問題真是不懂。在網(wǎng)上也查不到好的方法，求高手解答一下 內生細菌被成功分離后，先用2種培養(yǎng)基進行培養(yǎng)： 完全培養(yǎng)基：蛋白胨 10 g，NaCl 5 g，H2O 1000 mL，pH 7.0[68]。 基本培養(yǎng)基：（NH4）2HPO4 3 g，K2HPO4 2 g，NaCl 1 g，煙酸 20 μg，VBl 10 μg，VB2 20 μg，泛酸鈣 20 μg，吡哆醇 20 g，生物素10 μg，對氨基苯甲酸10 μg，MgSO4·7H2O，0.2 g，F(xiàn)eS04·7H2O 10 mg，H2O 1000 mL，MnSO4·H2O 5 mg[68] “PQQ 產(chǎn)生菌的初篩 將供試菌株接種于裝有10 mL 1%無水甲醇的基本培養(yǎng)基和1%無水甲醇的完全培養(yǎng)基的 50 mL 發(fā)酵管中，28℃、180 r/min 搖床培養(yǎng) 7 d，觀察菌體生長情況，選擇發(fā)酵液顏色由清澈變?yōu)榧t色的菌株�！� 這一步就是初步鑒定此菌可以產(chǎn)出PQQ，但是為什么要用兩個培養(yǎng)基呢？一個不就已經(jīng)夠了？？他所說的變成紅色，應該是兩個培養(yǎng)液都能變成紅色的才是合格的？ 再進行復篩： “挑取初篩菌株的單菌落，接入裝有 10 mL MPQ 培養(yǎng)基的發(fā)酵管中，28℃、180 r/min，振蕩培養(yǎng) 72 h，然后將全部培養(yǎng)液倒入裝有 50 mL MPQ 培養(yǎng)基的三角瓶中，28℃、180r/min 振蕩培養(yǎng) 7 d。 真空抽濾器抽濾棄菌體，上清液加入 3 倍體積的無水甲醇置于 4℃冰箱過夜，10 000r/min 離心 20 min 取上清，pH 調至 3.5。 MPQ 培養(yǎng)基：MgSO4 1.5 g，（NH4）2SO4 3 g，KH2PO4 1.4 g，Na2HPO4 3 g，檸檬酸鐵 30 mg，CaCl2·2H2O 30 mg，MnCl2·4H2O 0.5 mg，ZnSO4·7H2O 5 mg，CuSO4·5H2O 0.5mg，H2O 1000 mL�！� 隨后就用HPLC進行PQQ值得測定。 不明白為什么換成這個培養(yǎng)基了，怎么不用基本培養(yǎng)基呢？這兩個有什么區(qū)別？ “真空抽濾器抽濾棄菌體，”然后又加入“上清液加入 3 倍體積的無水甲醇置于 4℃冰箱過夜”， 這步還是發(fā)酵啊，怎么把菌體去掉了，濾紙過濾不了微生物，發(fā)酵液繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)，去菌體的目的是為了HPLC做準備？？？ 謝謝大家。。~~~ 那篇文章已在附件 |
2樓2014-08-27 17:46:45
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