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z631535213木蟲 (正式寫手)
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[求助]
關(guān)于Tris-HCl緩沖液的問題 已有4人參與
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配制的Tris-HCl(0.05mol/L,25℃)若干PH區(qū)間度的緩沖液用于 病毒DNA的提取與PCR 中。 1.這個(gè)緩沖液需要滅菌嗎?要是需要滅菌,請(qǐng)問該怎么滅菌?高溫高壓還是還是用超濾膜?高溫高壓滅菌后會(huì)不會(huì)PH有很大的影響呢 2.Tris溶液我能不能配成母液的形式儲(chǔ)存,用的時(shí)候稀釋到需要的程度? 拜謝各位蟲友。 |
DOPA |
| 是的DNA提取一般是不用滅菌的,如果想滅菌可以用濕熱滅菌(tris,TES都可以),配置成母液用時(shí)稀釋,根據(jù)Henderson-Hasselbalch方程,pH不會(huì)變化,但是實(shí)際上有波動(dòng),不過影響不大。用緩沖液最重要的是注意緩沖范圍,特定溫度下查pKa,緩沖范圍在pKa±0.5 |
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無機(jī)及分析化學(xué)中學(xué)的Henderson-Hasselbalch公式加上同離子效應(yīng),只要水中沒有其他離子干擾,緩沖液稀釋pH是不會(huì)變的,但實(shí)際中的水達(dá)不到無離子,尤其是蒸餾水,無論蒸餾多少次,水中都會(huì)殘留離子,所以稀釋以后會(huì)有波動(dòng),但是波動(dòng)很小不影響使用。100×稀釋沒問題。你實(shí)在不放心就稀釋以后測(cè)測(cè)看。使用緩沖要注意緩沖范圍,比如pH8.0的Tris-HCl在4℃下就幾乎沒有緩沖能力了。 |
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