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Dearstar新蟲 (小有名氣)
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[交流]
請教pPIC9載體上xhoI位點明明說是特異性的，為什么分析切得到了二個位置有。。 已有1人參與
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pPIC9載體說明上說，載體構(gòu)建過程中，可供使用的單一限制性內(nèi)切酶位點為Xho I, SnaB I, EcoR I, Avr II, Not I. 為什么分析了pPIC9的序列卻發(fā)現(xiàn)二個位置有xho I這個酶切位點， 一個是1192.一個是5709。真心不知道如果以后用xhoI 酶切的時候會怎么樣。有沒有做過的指導(dǎo)一下。 另外如果我要是選擇將我的目的片斷插入到pPIC9K中，選擇用Ecor I 和 Not I 的話，信號肽酶切位點之后， 到Ecor I的幾個氨基酸是怎么去掉的。 小妹初入酵母，還不是特別明白，跪求高手指教啊 |
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2樓2014-08-29 09:38:48
3樓2014-08-29 11:27:41
4樓2014-08-29 22:11:09
kehan777
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Dearstar(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2014-09-01 19:22:22
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1，信號肽酶切位點之后， 到EcoRI的幾個氨基酸是怎么去掉的？ 看序列，α-Factor secretion signal(s)（949-1218），EcoRI之前，只后只多出了GTA,這三個堿基，也就是1個AA，應(yīng)該沒什么影響。 2，EcoRI,NotI 雙酶切載體，如果XhoI有兩個酶切位點（分析確實有），則出現(xiàn)三個條帶，一個是很小的條帶（舍棄），另外兩個是比較大的（兩EcoRI之間的，NotI 和EcoRI‘之間），回收兩個大條帶，然后和你的目的片段（EcoRI,NotI ）連接： 如果是三片段同時連接，連接后可能出現(xiàn)“兩EcoRI之間的”正向插入，反向插入，沒有插入三種情況，可以挑多一兩個克隆，先提質(zhì)粒看條帶大小，然后選擇符合大小的樣品，加設(shè)計一條引物測序驗證。 |
5樓2014-08-31 22:02:37
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6樓2014-09-01 09:04:57
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7樓2014-09-01 09:35:21
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8樓2014-09-01 09:36:04
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9樓2014-09-01 09:36:57
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10樓2014-09-01 18:42:11
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