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Dearstar新蟲 (小有名氣)
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[交流]
請(qǐng)教pPIC9載體上xhoI位點(diǎn)明明說(shuō)是特異性的，為什么分析切得到了二個(gè)位置有。。 已有1人參與
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pPIC9載體說(shuō)明上說(shuō)，載體構(gòu)建過程中，可供使用的單一限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)為Xho I, SnaB I, EcoR I, Avr II, Not I. 為什么分析了pPIC9的序列卻發(fā)現(xiàn)二個(gè)位置有xho I這個(gè)酶切位點(diǎn)， 一個(gè)是1192.一個(gè)是5709。真心不知道如果以后用xhoI 酶切的時(shí)候會(huì)怎么樣。有沒有做過的指導(dǎo)一下。 另外如果我要是選擇將我的目的片斷插入到pPIC9K中，選擇用Ecor I 和 Not I 的話，信號(hào)肽酶切位點(diǎn)之后， 到Ecor I的幾個(gè)氨基酸是怎么去掉的。 小妹初入酵母，還不是特別明白，跪求高手指教啊 |
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2樓2014-08-29 09:38:48
3樓2014-08-29 11:27:41
4樓2014-08-29 22:11:09
kehan777
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Dearstar(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-09-01 19:22:22
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1，信號(hào)肽酶切位點(diǎn)之后， 到EcoRI的幾個(gè)氨基酸是怎么去掉的？ 看序列，α-Factor secretion signal(s)（949-1218），EcoRI之前，只后只多出了GTA,這三個(gè)堿基，也就是1個(gè)AA，應(yīng)該沒什么影響。 2，EcoRI,NotI 雙酶切載體，如果XhoI有兩個(gè)酶切位點(diǎn)（分析確實(shí)有），則出現(xiàn)三個(gè)條帶，一個(gè)是很小的條帶（舍棄），另外兩個(gè)是比較大的（兩EcoRI之間的，NotI 和EcoRI‘之間），回收兩個(gè)大條帶，然后和你的目的片段（EcoRI,NotI ）連接： 如果是三片段同時(shí)連接，連接后可能出現(xiàn)“兩EcoRI之間的”正向插入，反向插入，沒有插入三種情況，可以挑多一兩個(gè)克隆，先提質(zhì)�？礂l帶大小，然后選擇符合大小的樣品，加設(shè)計(jì)一條引物測(cè)序驗(yàn)證。 |
5樓2014-08-31 22:02:37
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6樓2014-09-01 09:04:57
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7樓2014-09-01 09:35:21
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8樓2014-09-01 09:36:04
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9樓2014-09-01 09:36:57
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10樓2014-09-01 18:42:11
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