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云海尋煙新蟲 (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于病毒滴度 已有1人參與
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各位蟲友，我做了一次病毒滴度，但是很莫名其妙的細(xì)胞就死了，請(qǐng)各位蟲友幫忙分析一下。 具體過程： 1、用10%FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)Vero細(xì)胞 2、做病毒梯度：用無血清無雙抗的DMEM培養(yǎng)基稀釋病毒液，分別得到-2、-3、-4三個(gè)梯度； 3、待細(xì)胞長(zhǎng)至80%左右時(shí)，將上述病毒加至12孔板中，100微升每孔，另每孔加1ml無血清無雙抗培養(yǎng)基； 4、2小時(shí)20分鐘后換液，（因有事耽誤了，沒能在兩小時(shí)之內(nèi)換液，且換液前觀察已發(fā)現(xiàn)部分細(xì)胞呈沙狀）過夜培養(yǎng) 5、觀察發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞大部分呈沙狀。 附圖： 無標(biāo)題004.jpg 無標(biāo)題002.jpg 無標(biāo)題003.jpg |
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wolfman840
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2樓2014-09-04 16:47:09
云海尋煙
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1、培養(yǎng)基支原體情況沒有檢查，而且從來沒有做過檢查呀，請(qǐng)問一下這個(gè)該怎么檢查呀？ 2、沒有做平行，以前都是用24孔板，而且是-4、-5、-6這三個(gè)梯度，現(xiàn)在用12孔板，-2、-3、-4這三個(gè)梯度，病毒量比較大就沒做平行； 3、病毒吹打了，每個(gè)都用1ml槍頭吹打50次； 4、以前做病毒稀釋一直是用無血清的培養(yǎng)基稀釋病毒的，從來沒有出現(xiàn)過這種情況啊； 5、接毒前細(xì)胞狀況良好； 6、有無毒細(xì)胞平行，用的是無血清無雙抗的培養(yǎng)基，跟其他有病毒的細(xì)胞一塊換的液，均換為10%血清的DMEM; 7、這個(gè)可以考慮一下，但是為什么會(huì)跟梯度有關(guān)呢？ |
3樓2014-09-05 09:01:20
wolfman840
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4樓2014-09-09 15:37:31
云海尋煙
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5樓2014-09-10 13:32:54
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