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a479967958銅蟲 (著名寫手)
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[求助]
計數(shù)所得藻密度和紫外可見吸光度值不成線性，如何解決?
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每天計數(shù)、測吸光度各一次，現(xiàn)在得到6對數(shù)據(jù)，做了一下散點圖，毫無頭緒，不知道問題出在哪，請懂的人幫忙分析分析，多謝啦~~ 計數(shù)：細胞初始密度是2~3*10^4，用血球計數(shù)板4*4*25的計數(shù)區(qū)，每次吹打搖勻細胞懸濁液仍在轉(zhuǎn)動的時候用100uL取樣，記錄上下兩室的計數(shù)區(qū)細胞總數(shù)，剩余懸濁液打回（樣品總量是5ml）；樣品計數(shù)7次，去掉較低和較高異常值，剩下求平均，如此得到細胞密度。計數(shù)的原則是左上邊壓線者計入、團聚體根據(jù)可見細胞數(shù)，一般計1個，較多時計2個或3個（取一次樣，上下兩室總共能看到1~2個團聚）。 Abs：按照方法設(shè)定(波長、樣品重復(fù)讀數(shù)3次)→自動調(diào)零→讀取樣品的常規(guī)步驟，先用培養(yǎng)液自動調(diào)零，然后換細胞懸濁液，潤洗時將培養(yǎng)液倒掉→倒扣吸水→約2ml藻液潤洗→倒扣吸水→加藻液→輕輕吹打混勻→立即摁F9測吸光度，每次取樣前仍充分混勻。 PS：1、雖說充分混勻，但仍有一小部分細胞團聚在一起，因擔心吹打用力過度會破壞細胞，所以允許那一小部分細胞團聚； 2、測吸光度時，第一次測定完畢后，讓比色皿在樣品池停留一小段時間，吸光度不會改變，表明分散的細胞短時間內(nèi)不會因為沉降改變吸光度； 3、之前用梯度稀釋的方法，一次性測5個濃度的吸光度，做出的標曲線性相關(guān)度特別高，接近1（做了3次吧，但是3次的數(shù)據(jù)合起作圖來之后相關(guān)性下降了），不過上述測定將波長換成了全波段掃描得到的特征峰波長。 4、假如能夠做出相關(guān)性>0.9的標準曲線，是不是以后做實驗的時候就可以只測吸光度？  因為樣品組別設(shè)置比較多，而且又有3個平行，一個個數(shù)會數(shù)死的。。看圖的話，計數(shù)所得的曲線比較符合常理（適應(yīng)→對數(shù)），而Abs就有點怪，這難道是紫外可見分光光度計不穩(wěn)定？  話說實驗室這臺儀器（島津UV-2401）是有點年份了。。還是那一小部分細胞團聚惹的禍？有點長，煩請不吝指點  散點圖V1.png |
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波長多少? [ 發(fā)自小木蟲客戶端 ] |
2樓2014-09-10 10:20:42
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