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張志敏1987銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
沙門氏菌總蛋白的提取!急需幫助!
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我的提取步驟: 1、將培養(yǎng)至對數(shù)生長期的細(xì)菌移至離心管,8000轉(zhuǎn)離心15min; 2、用5%山梨醇重懸清洗4次; 3、按每20mg濕重菌體加500ul裂解液,超聲裂解,超聲條件300w,10s/10s,直至變清; 4、4度,18000轉(zhuǎn)離心60min,取上清快速轉(zhuǎn)到預(yù)冷的管中,置于-80度儲存。 裂解液配方:尿素 4.2g 硫脲 1.52g CHAPS 0.4g 加水至10ml,溶解,分裝成1ml,10管 臨用前加入0.0098g/ml 的DTT 和蛋白酶抑制劑10ul/ml 請問我哪里不合適,導(dǎo)致蛋白質(zhì)量不好,跑出二維電泳的圖一直不好! 請各位大俠指教,謝謝! ![]() ![]() |

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銅蟲 (初入文壇)

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