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[求助]
新設(shè)計的引物擴出來有兩條帶，是什么原因啊？大哥大姐！
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親愛的師兄師姐，小妹最近在做一個植物基因的克隆，我是分成兩段來擴的。實驗已經(jīng)擴出來前半段序列，后半段序列利用cDNA設(shè)計得引物在DNA里面擴增（主要目的是想把外顯子和內(nèi)含子都擴增出來），但是在擴后半段序列跑的時候，電泳成像顯示有兩條帶，一條大約1600bp，一條大約1300bp，而我的目的條帶在1600-2000bp之間才對。我用的體系是： DNA 4μL plus Buffer 5μL dNTP 4μL PrF 1μL R 1μL plus TaqE 0.8μL ddH2O 34.2 程序是： 95℃ 5min 95℃ 30sec 退火（48-60℃）1min 72℃ 1min20sec 72℃ 7min 12℃ forever 其中一對引物： Two primers complementarity. Max complementarity in continuous: 3 bp, free energy= 0.30 Kcal/mol 5'-TGAAGAAGATGCTGGGGAAGAAGA-3' ||| 3'-GTTATTTGGGAGGCGAAATAGG-5' 請師兄師姐幫忙指點一下，感激不盡�。�！祝師兄師姐實驗順利，生活愉快！ |
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2樓2014-09-19 14:52:22
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