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在單核細(xì)胞中DH-PS誘導(dǎo)產(chǎn)生IL-1ra的細(xì)胞內(nèi)信號途徑 為研究介導(dǎo)DH-PS誘導(dǎo)IL-1ra表達(dá)的細(xì)胞內(nèi)信號途徑，我們利用各種蛋白激酶的抑制劑，包括ERK/ELK（PD98059），JNK（SP600125），p38 MAPK（SB203580），PI3K（LY294002）和NFκB抑制劑（Helenalin和MG132），這些抑制劑的使用濃度對細(xì)胞無毒性（Fig.S1）。 THP-1細(xì)胞（圖8A）或人CD14+細(xì)胞（圖8B）預(yù)先用不同濃度的這些抑制劑或DMSO作對照處理60分鐘，然后向培養(yǎng)基中加入DH-PS（100微克/毫升）繼續(xù)培養(yǎng)18小時。在THP-1和人CD14+細(xì)胞中，ERK/ELK，JNK，p38 MAPK，PI3K和NFκB的抑制劑降低IL-1ra的分泌，且呈劑量依賴性。為了確定這些信號分子是否在轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)節(jié)了IL-1ra，用給定濃度抑制劑或DMSO預(yù)處理THP-1細(xì)胞60分鐘，再用含DH-PS（100微克/毫升）的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)12小時。用RT-PCR檢測IL-1ra mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果表明，ERK/ELK，PI3K和NFκB（Helenalin）的抑制劑抑制IL-1ra mRNA的表達(dá)（圖8C），這與在蛋白水平得到的有關(guān)IL-1ra產(chǎn)生的結(jié)果（圖8A）是一致的。另一方面，JNK和p38 MAPK的抑制劑對IL-1ra mRNA表達(dá)無顯著效果。 DH-PS比F3（靈芝）誘導(dǎo)更多IL-1ra 靈芝是一種用了幾個世紀(jì)的中草藥，主要用于治療包括炎癥和癌癥等多種疾病[28]。 F3是靈芝多糖提取物，已被報道在小鼠具有免疫調(diào)節(jié)功能并誘導(dǎo)IL-1ra【27】。因此，我們研究了DH-PS或F3對人CD14+細(xì)胞和THP-1細(xì)胞產(chǎn)生IL-1ra的誘導(dǎo)作用以及IL-1ra mRNA在THP-1細(xì)胞表達(dá)的動力學(xué)。人CD14+細(xì)胞（圖9A）和THP-1細(xì)胞（圖9C）與不同濃度的DH-PS或F3培養(yǎng)18小時。同時研究了CD14+細(xì)胞經(jīng)DH-PS和F3（100微克/毫升）處理后IL-1ra分泌的動力學(xué)（圖9B）。如圖9A和9C所示，DH-PS和F3都可以誘導(dǎo)IL-1ra的產(chǎn)生，且具有劑量依賴性特點，但DH-PS誘導(dǎo)的最大水平是F3的2.2倍，這在CD14 +和THP-1細(xì)胞是一致的。至于在CD14+細(xì)胞中IL-1ra誘導(dǎo)的動力學(xué)，DH-PS的誘導(dǎo)作用比F3更快且誘導(dǎo)程度更大，在3,24和48小時時對IL-1ra的誘導(dǎo)分別是1.4，1.7和2.0倍，72小時時達(dá)2.1倍（圖9B）。我們還研究了DH-PS或F3在THP-1細(xì)胞對IL-1ra mRNA表達(dá)的動力學(xué)。如圖9D所示，DH-PS對IL-1ra mRNA誘導(dǎo)程度比F3更高，這和ELISA數(shù)據(jù)是一致的。另一方面，F(xiàn)3在三個健康供體所提供的CD14+細(xì)胞中比DH-PS誘導(dǎo)產(chǎn)生更多IL-1β：F3對IL-1β的誘導(dǎo)（366皮克/毫升，約為PBS對照的52倍）（Fig.S3）；DH-PS對IL-1β的誘導(dǎo)（3個健康供體分別為55，24和70皮克/毫升圖4）。 |
2樓2014-09-24 00:11:48
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