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銀蟲 (正式寫手)

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專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子

[求助] 如何判斷蛋白的含量下調(diào)是否與泛素化蛋白酶體降解有關(guān)？

藥物處理腫瘤細(xì)胞后，發(fā)現(xiàn)有一個蛋白下調(diào)，想知道其下調(diào)是否與泛素化蛋白酶體降解有關(guān)。但關(guān)于這個實驗的原理和設(shè)計上有很多不懂的問題：
1.是否可以用MG132預(yù)處理細(xì)胞，再用藥物處理，比較MG132處理與否，該蛋白含量的變化幅度有無改變？
2.文獻(xiàn)中常用MG132預(yù)處理細(xì)胞，再用藥物處理，比較MG132處理與不處理后，WB檢測泛素的含量的變化（多條帶的smear）。試問：如果是經(jīng)過泛素化降解，泛素條帶是變濃還是變淺？還有覺得這樣的實驗設(shè)計不能說明問題，就算泛素化條帶發(fā)生變化，也不能說明目的蛋白是被泛素化蛋白酶體降解的，而可能是細(xì)胞很多其它蛋白經(jīng)歷泛素化降解所致。
3.如果目標(biāo)蛋白被泛素化降解，那么目標(biāo)蛋白上肯定連接有不同數(shù)量的泛素，導(dǎo)致其分子量大小不一，用抗目標(biāo)蛋白的抗體檢測目標(biāo)蛋白，就會出現(xiàn)多條帶？
4. 未經(jīng)如何處理的細(xì)胞，用泛素化抗體檢測，也出現(xiàn)多條帶的smear，這是否說明細(xì)胞內(nèi)的泛素化降解隨時都存在，而與藥物處理無關(guān)？

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1樓 2014-09-28 10:17:12

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