 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1647 | 回復(fù): 2 | ||
洛洛丫頭新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
用鏈霉菌菌絲體做結(jié)合轉(zhuǎn)移得不到結(jié)合子，求大神指點(diǎn)？
|
|
我是用pkc1139質(zhì)粒構(gòu)建的載體，轉(zhuǎn)化入大腸桿菌ET12567( pUZ8002)中，與波塞鏈霉菌進(jìn)行結(jié)合轉(zhuǎn)移，基本方法如下： 將鏈霉菌從斜面接種于50mLTSB培養(yǎng)基中,28℃震蕩培養(yǎng)達(dá)到對數(shù)生長后期, 離心收集菌絲( 4000r/min, 10min, 4% ), 洗滌后重懸于20mLLB培養(yǎng)基中, 作為受體菌; 將質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)化Ecoli ET12567( pUZ8002)感受態(tài)細(xì)胞, 將陽性轉(zhuǎn)化子接種于LB培養(yǎng)基(含Apr50g/mL、卡那霉素 25 g/mL、氯霉素25g/mL), 37%振蕩培養(yǎng)12h, 2%接種于50mLLB液體培養(yǎng)基中(含Apr50g/mL、卡那霉素25g/mL、氯霉素25g/mL), 37% 振蕩培養(yǎng)至A600達(dá)到04~ 06, 離心收集菌絲并洗滌后, 將菌絲重懸于1~2mLLB培養(yǎng)基中, 作為供體菌; 取適量供體菌與受體菌混勻, 并均勻涂布于MS培養(yǎng)基平板, 28%靜置培養(yǎng)20h后加蓋抗生素(Apr與奈啶酮酸終濃度均為50g/mL), 37℃ 靜置培養(yǎng)7d, 挑取陽性接合子。 我已經(jīng)做了好幾個月了，還是沒有長結(jié)合子，求高人指點(diǎn)？ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有235人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
gggracezhang
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 232.5
- 帖子: 7
- 在線: 10.5小時(shí)
- 蟲號: 3317613
- 注冊: 2014-07-10
- 專業(yè): 藥物學(xué)其他科學(xué)問題
2樓2015-12-29 15:18:41
LJ_0824
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 16.5
- 帖子: 2
- 在線: 12.1小時(shí)
- 蟲號: 3317052
- 注冊: 2014-07-10
- 專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)
3樓2016-10-10 14:12:57
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 洛洛丫頭 的主題更新
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 330分求調(diào)劑 +5 | qzenlc 2026-03-29 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 22408 359分調(diào)劑 +4 | Qshers 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +9 | lin0039 2026-03-26 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +7 | A child 2026-03-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑一志愿哈工大324 +7 | 閆旭東 2026-03-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 315分求調(diào)劑 +7 | 26考研上岸版26 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 330一志愿中國海洋大學(xué) 化學(xué)工程 085602 有讀博意愿 求調(diào)劑 +3 | wywy.. 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料與化工085600，總分304，本科有兩篇sci參與，求調(diào)劑 +10 | 幸運(yùn)的醬醬 2026-03-22 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 材料292調(diào)劑 +12 | 橘頌思美人 2026-03-23 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑（080500） +4 | A child 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 考研化學(xué)308分求調(diào)劑 +10 | 你好明天你好 2026-03-23 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 359求調(diào)劑 +4 | 王了個楠 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 機(jī)械學(xué)碩310分，數(shù)一英一，一志愿211本科雙非找調(diào)劑信息 +3 | @357 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿上海交大生物與醫(yī)藥專碩324分，求調(diào)劑 +6 | jiajunX 2026-03-22 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 機(jī)械學(xué)碩總分317求調(diào)劑！�。�！ +4 | Acaciad 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 【2026考研調(diào)劑】制藥工程 284分 求相關(guān)專業(yè)調(diào)劑名額 +4 | 袁奐奐 2026-03-25 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 282求調(diào)劑 +3 | wcq131415 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[有機(jī)交流]
 有機(jī)合成求助
 20+3
|
FENGSHUJEI 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 269求調(diào)劑 +4 | 我想讀研11 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +3 | ALULU4408 2026-03-23 | 3/150 |
|