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wencaoxi新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
請(qǐng)問(wèn)western blot檢測(cè)信號(hào)通路時(shí)，未活化和活化樣品的活化水平如何做出顯著性差異？ 已有1人參與
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本人做western blot檢測(cè)信號(hào)通路（不限哪一種通路分子）時(shí)，總是做不出文獻(xiàn)中的差異顯著的活化條帶，很苦惱 。文獻(xiàn)中，未活化樣品的條帶幾乎看不見(jiàn)，而活化樣品一般可見(jiàn)隨著時(shí)間進(jìn)程會(huì)有明顯的增強(qiáng)（或減弱），但這對(duì)于我而言實(shí)在是可望而不可及的結(jié)果。我用抑制劑處理時(shí)可以看到條帶被顯著抑制，但正常培養(yǎng)的情況下信號(hào)通路都是被活化的，根本沒(méi)看到過(guò)未刺激時(shí)不活化的狀況。 是不是需要改變培養(yǎng)條件比如用無(wú)血清培養(yǎng)基處理24小時(shí)？做WB時(shí)是不是要盡量縮短曝光時(shí)間和降低抗體使用濃度？有什么訣竅在里面呢？ 我感覺(jué)對(duì)信號(hào)通路的活化還有些根本認(rèn)識(shí)上的問(wèn)題，可能是造成做不出理想結(jié)果的原因。懇請(qǐng)各位大俠指導(dǎo)！ |
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polly2879
新蟲(chóng) (初入文壇)
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- 蟲(chóng)號(hào): 1719673
- 注冊(cè): 2012-03-27
- 專(zhuān)業(yè): 細(xì)胞死亡
2樓2015-01-19 14:40:11
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