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lihuahan

銀蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
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帖子: 44
在線: 41小時
蟲號: 2795325
注冊: 2013-11-12
性別: MM
專業(yè): 食品科學(xué)基礎(chǔ)

[求助] 蛋白純化求助~

N端融合6*His標(biāo)簽后原核表達(dá)，現(xiàn)在低溫誘導(dǎo)后可溶性目的蛋白明顯增加，但不知道夠不夠做純化的量，大俠們幫忙鑒定一下~
Lane1： Maker；
Lane2: 16℃過夜誘導(dǎo)后上清，IPTG終濃度為0.4M；
Lane3: 16℃過夜誘導(dǎo)后沉淀，IPTG終濃度為0.4M；
Lane4: 25℃ 6h誘導(dǎo)后上清，IPTG終濃度為0.4M；
Lane5: 25℃ 6h誘導(dǎo)后沉淀，IPTG終濃度為0.4M；
Lane6: 37℃ 3h誘導(dǎo)后上清，IPTG終濃度為0.4M；
Lane7: 37℃ 3h誘導(dǎo)后沉淀，IPTG終濃度為0.4M；
還有一些關(guān)于蛋白純化的問題，
1. 蛋白純化時有的用Tris之類的緩沖液，有的用磷酸鹽緩沖液，這兩種有什么區(qū)別嗎？哪種效果更好一些？
2. 純化時緩沖液的PH值應(yīng)該怎樣去確定？看到有人說低于或高于蛋白質(zhì)的等電點1左右，這樣是否可行？
3. 想自己裝柱子，有看到親和層析柱工具套裝，有人用過嗎？這個效果怎么樣？純化過程是否都需要在4℃進(jìn)行？

K9W(XRE5}IP)NV0T3KUVSM3.jpg

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1樓 2014-10-07 16:34:34

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