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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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gu666hong

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[求助] 體外轉(zhuǎn)錄RNA，為什么會(huì)出現(xiàn)2條帶已有1人參與

最近做了體外轉(zhuǎn)錄RNA實(shí)驗(yàn)，質(zhì)粒用的PGEM-4Z，先用Nde Ⅰ單酶切1h線性化，然后轉(zhuǎn)錄RNA 2h，然后加DNase Ⅰ 37℃ 1h去除模板，
然后跑瓊脂糖膠鑒定，結(jié)果出現(xiàn)2條帶

單酶切體系：NdeⅠ1μL buffer G 1μL 質(zhì)粒6μL DEPC水2μL ；10μL
轉(zhuǎn)錄體系：5*T7buffer 10μL，單切后質(zhì)粒10μL，T7酶2μL，RRI 2μL，NTP 4μL,DEPC水 22μL；50μL

Administrator 2014-10-09 10hr 04min.jpg

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1樓 2014-10-10 08:37:32

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gu666hong

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2樓: Originally posted by biostar2009 at 2014-10-10 19:28:21
你這個(gè)是什么agarose gel？
RNA變性沒(méi)有？RNA的高級(jí)結(jié)構(gòu)可能產(chǎn)生多條條帶。
建議走Urea-PAGE再看，如果RNA太大，甲醛變性agarose gel

我用變形膠已經(jīng)跑完了，但是還是有2條帶。哎，不知道轉(zhuǎn)錄哪里出了問(wèn)題了

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4樓2014-10-11 15:41:47

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myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-10-11 15:44:57

你這個(gè)是什么agarose gel？
RNA變性沒(méi)有？RNA的高級(jí)結(jié)構(gòu)可能產(chǎn)生多條條帶。
建議走Urea-PAGE再看，如果RNA太大，甲醛變性agarose gel

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2樓2014-10-10 19:28:21

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我用的是一般的瓊脂糖膠，RNA變性一般是70攝氏度5min，然后跑膠，因?yàn)橹稗D(zhuǎn)錄過(guò)一次，只有一條帶，這次是過(guò)了一個(gè)月又轉(zhuǎn)的，失敗了。你說(shuō)的Urea-PAGE沒(méi)做過(guò)，甲醛變性膠我可以嘗試下，只是marker我用DNA的么？我這沒(méi)有RNA的marker。另外想問(wèn)下，RNA要多大用Urea-PAGE，多大用甲醛變性膠，我的RNA轉(zhuǎn)錄的大小也就500多bp

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3樓2014-10-11 10:32:31

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biostar2009

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4樓: Originally posted by gu666hong at 2014-10-11 15:41:47
我用變形膠已經(jīng)跑完了，但是還是有2條帶。哎，不知道轉(zhuǎn)錄哪里出了問(wèn)題了...

甲醛變性的？loading也是用的甲醛變性的loading？還是之前轉(zhuǎn)錄過(guò)只有一條帶的？模板換過(guò)沒(méi)？

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5樓2014-10-11 18:30:04

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