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夕宇夢(mèng)亭金蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
關(guān)于基因克隆和植物表達(dá)載體的一些問(wèn)題
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我想克隆一個(gè)基因連接到植物表達(dá)載體上，轉(zhuǎn)化植物，分別從基因組和CDNA上克隆。 1、直接從外顯子邊緣擴(kuò)增，比如說(shuō)只擴(kuò)增CDS區(qū)，會(huì)不會(huì)有轉(zhuǎn)化以后不能正常表達(dá)的問(wèn)題？因?yàn)槲衣?tīng)說(shuō)，必須要從非編碼區(qū)擴(kuò)增，不然可能不表達(dá)。 2、如果設(shè)計(jì)引物的時(shí)候要往兩端的非編碼區(qū)UTR進(jìn)行，那么3'-UTR和5'-UTR大概要多長(zhǎng)？各50-100bp左右夠嗎？ 3、如果不需要擴(kuò)增UTRSs，那么為了保證測(cè)序結(jié)果的準(zhǔn)確性，需要在我的目的基因兩端都加上一點(diǎn)序列嗎？因?yàn)檎f(shuō)公司的測(cè)序結(jié)果在測(cè)序樣兩端的堿基結(jié)果存在一定的錯(cuò)誤率，所以為了驗(yàn)證我的基因是不是完全正確，需要兩端多加一點(diǎn)序列，方便對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行比對(duì)。 |
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蟲(chóng)四
金蟲(chóng) (初入文壇)
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2樓2017-01-11 14:21:02
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