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曾經(jīng)走過金蟲 (初入文壇)
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[求助]
做酵母雙雜在二缺培養(yǎng)液中酵母搖成球狀，為什么呀？ 已有3人參與
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| 本人現(xiàn)在在做酵母雙雜，將AD和BK的載體導(dǎo)入后，在二缺板上長了，然后想在二缺液中搖起來點四缺板，但是酵母聚集成了球狀，不是分散的，有哪位見過這種情況？？急求 |
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Neo2000
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4樓2014-10-11 10:56:32
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2樓2014-10-11 09:21:22
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建議參考德國的酵母雙雜交系統(tǒng) 特點和優(yōu)點： 1. 可以篩選不同蛋白-蛋白之間相互作用的強度； 2. 利用銅誘導(dǎo)的CUP1/ACE1系統(tǒng)能更有效的檢測體內(nèi)蛋白相互作用； 3. 利用銅抗性這種嚴格的篩選，會出現(xiàn)很少的假陽性； 4. 利用GFP這種綠色熒光蛋白的報告基因，篩選陽性菌株可以節(jié)省大量的時間； 5. 篩選陽性菌株不需要外部酶底物，如X-Gal； 6. 適合高通量的篩選分析。 產(chǎn)品介紹： 酵母雙雜交系統(tǒng)是一種用于篩選體內(nèi)蛋白-蛋白之間相互作用的方法，它依賴于DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域和DNA激活結(jié)構(gòu)域的分離，并將這兩個結(jié)構(gòu)域基因分別與兩個蛋白基因融合在一起，如果兩種蛋白能夠相互作用，就會使這兩個結(jié)構(gòu)域重組成一個有活性的轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物，這樣，就會使報告基因得以表達。 MoBiTec的ACE1雙雜交系統(tǒng)是一個強大的工具，它可以用于新基因的發(fā)現(xiàn)和功能分析，而且可以有效的鑒別體內(nèi)蛋白-蛋白的作用。它將銅誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄因子ACE1和銅抗性CUP1基因與作為報告基因綠色熒光蛋白GFP基因結(jié)合起來。兩種相互作用的蛋白分別與ACE1的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域和DNA激活結(jié)構(gòu)域相融合，從而使我們可以通過下面的方法篩選：1.在含銅的培養(yǎng)基上生長的細胞；2.依賴銅表達的強熒光GFP可以通過紫外光檢測到。 因此，這種新技術(shù)，可以很有效的通過一步法篩選可能的陽性表達，即在含有銅的培養(yǎng)基上生長并發(fā)出綠色熒光的菌株。它是一種快速、高靈敏度和更值得信賴的檢測方法。不斷改變銅濃度還可以篩選出不同蛋白之間相互作用的強度。 本網(wǎng)鏈接 http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=7590557&view=mp |
5樓2014-10-13 08:23:25
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