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新蟲 (初入文壇)

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專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)

[求助] 天冬酰胺酶酶活測(cè)定中的一點(diǎn)疑問

請(qǐng)教一下各位前輩，下面測(cè)酶活的方法中，0.07是怎么來的、是個(gè)什么意思。要是能解釋一下這個(gè)公式為什么這么算就更好了。

實(shí)驗(yàn)方法：
吸取1ml菌液入Ep管，12 000 r/min離心5min，收集菌體棄去上清，加入蒸餾水1ml洗滌，混懸，12 000r/min離心5min，棄上清。重復(fù)上述操作2～3次，加入pH8.4硼酸緩沖液1ml混懸。
準(zhǔn)備一組(2支)蒸餾水準(zhǔn)備管：取10ml的潔凈試管2只，每管加3.5ml蒸餾水。
另取2支10ml的潔凈試管，分別加入0.04 mol/L天冬酰胺底物，0.1 mol/L pH8.4硼酸緩沖液各1ml，37℃水浴5min，其中一只加入細(xì)胞懸液20μl，另一支為對(duì)照管。反應(yīng)15min后分別加入50%三氯乙酸1ml終止反應(yīng)。再?gòu)慕K止反應(yīng)管中各支取500μl進(jìn)蒸餾水準(zhǔn)備管，每管分別加入與25%NaOH以1:1配好的奈氏液1ml顯色，500nm處測(cè)OD值。
計(jì)算：酶活力(U)=[(OD×1000)/(0.07×15x)]×(3+x/1000) 。x為取樣體積(本實(shí)驗(yàn)為20μl)

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1樓 2014-10-12 18:21:10

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