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smilentless

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[求助] 轉(zhuǎn)染（transformation）失敗，不長(zhǎng)菌落已有1人參與

我想擴(kuò)增pUc19，用的是XL1-Blue細(xì)胞，轉(zhuǎn)染的pUc19DNA（0.1ng/μl），固體培養(yǎng)基是自制LB-amp培養(yǎng)基，37℃16h培養(yǎng)，操作均沒(méi)問(wèn)題，只是中間有步42℃45s的水浴鍋加熱到43℃了，不知道是不是這個(gè)問(wèn)題。

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1樓 2014-10-18 11:39:42

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s_lich28

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43度水浴不是問(wèn)題，建議樓主同時(shí)做一個(gè)pUC18的positive control（pUC18 DNA應(yīng)該在XL1-Blue的kit里有附帶），排除菌體competent能力的問(wèn)題�；蛘呖梢該Q一個(gè)competent菌株試試，同樣可以排除XL1-Blue本身的問(wèn)題。

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2樓2014-10-18 22:02:16

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引用回帖:

2樓: Originally posted by s_lich28 at 2014-10-18 22:02:16
43度水浴不是問(wèn)題，建議樓主同時(shí)做一個(gè)pUC18的positive control（pUC18 DNA應(yīng)該在XL1-Blue的kit里有附帶），排除菌體competent能力的問(wèn)題�；蛘呖梢該Q一個(gè)competent菌株試試，同樣可以排除XL1-Blue本身的問(wèn)題。

排除感受能力問(wèn)題要做一個(gè)pUC18的positive control（pUC18 DNA應(yīng)該在XL1-Blue的kit里有附帶）是什么意思額

，求教

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3樓2014-10-19 11:45:55

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★
smilentless: 金幣+2, ★★★很有幫助 2014-10-20 08:24:48

引用回帖:

3樓: Originally posted by smilentless at 2014-10-19 12:45:55
排除感受能力問(wèn)題要做一個(gè)pUC18的positive control（pUC18 DNA應(yīng)該在XL1-Blue的kit里有附帶）是什么意思額

，求教...

就是因?yàn)榇竽c桿菌本身的問(wèn)題質(zhì)粒DNA沒(méi)法進(jìn)入細(xì)菌，或者進(jìn)入后不表達(dá)，所以需要有一個(gè)陽(yáng)性對(duì)照（意思是用隨kit附帶的質(zhì)粒DNA去轉(zhuǎn)染的話如果大腸桿菌本身沒(méi)問(wèn)題的話那肯定能長(zhǎng)出菌落），以此來(lái)判斷大腸桿菌本身有沒(méi)有問(wèn)題。

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4樓2014-10-19 14:55:14

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引用回帖:

4樓: Originally posted by s_lich28 at 2014-10-19 14:55:14
就是因?yàn)榇竽c桿菌本身的問(wèn)題質(zhì)粒DNA沒(méi)法進(jìn)入細(xì)菌，或者進(jìn)入后不表達(dá)，所以需要有一個(gè)陽(yáng)性對(duì)照（意思是用隨kit附帶的質(zhì)粒DNA去轉(zhuǎn)染的話如果大腸桿菌本身沒(méi)問(wèn)題的話那肯定能長(zhǎng)出菌落），以此來(lái)判斷大腸桿菌本身有沒(méi)有 ...

非常感謝，下次有問(wèn)題希望還能向你請(qǐng)教

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5樓2014-10-20 08:25:29

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