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354929697銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
RNA稀釋濃度變化不大，od比值變好問題
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最近提RNA（trizol法提真菌RNA）濃度老是在700左右，260/280比值在1.2左右。今天又做了一回還是這樣，突發(fā)奇想多加一點水稀釋一下。原來是加20ul溶解，結(jié)果濃度是700左右，260/280比值在1.2左右，260/230在1.4左右；然后又加了20ul水，總量40ul，濃度基本沒變，260/280比值上升到1.4左右，260/230是1.6左右；然后我又加了40ul水，總量80ul，這下濃度變?yōu)?50左右，260/280比值>1.8，260/230在2.1左右。 原來跑電泳有拖尾現(xiàn)象，這一次還沒跑電泳，不知道情況怎么樣，電泳圖隨后補上。請問各位大神怎么回事呀~~ 跑完膠了，圖就不上了，那叫一個慘不忍睹。除了蛋白質(zhì)雜質(zhì)就沒別的東西了，RNA基本全部降解。 那么問題來了~~ 為什么稀釋之后比值數(shù)據(jù)挺好的？？？ 請求幫助，快糾結(jié)死我了。 我自己想的是不是樣品放多了（基本是用藥匙放兩到三勺），裂解不充分？ 吸上清的時候很小心了，是用的200槍頭兩次吸取，如果用氯仿萃取兩遍，那么第二遍萃取是不是RNA容易降解？？？ |
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teluoyi815
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4樓2014-11-18 11:21:08
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