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[求助]
求助大腸桿菌發(fā)酵問題 已有1人參與
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我們在做大腸桿菌的工程菌株發(fā)酵。以下是基本信息： 菌株為B21(DE3)； 攜帶質(zhì)粒為PTRC99Z質(zhì)粒（有外源基因）； 發(fā)酵罐：5L 培養(yǎng)基：多種培養(yǎng)基都試過。包括無機鹽、復(fù)合培養(yǎng)基（配方見《高細(xì)胞密度發(fā)酵技術(shù)》 李寅 等 著，化學(xué)工業(yè)出版社）。碳源用過葡萄糖以及甘油，現(xiàn)象相似。 發(fā)酵液pH:6.8，以氨水調(diào)控； 發(fā)酵罐溫度：25~30都用過，用以調(diào)節(jié)發(fā)酵初期細(xì)菌比生長速率； 發(fā)酵罐罐壓：0.06、0.04MPa以及0.02MPa都試過； 轉(zhuǎn)速：從400~900rpm都試過； 通氣量：200L/h到400L/h都試過； 通過補料速率，控制溶氧為30%； 用的有機氮源: 1.酵母抽提物 2.蛋白胨 3.蛋白胨+酵母抽提物; 無機氮源： 1、磷酸二氫銨； 2、硫酸銨。 至于碳源濃度,都是培養(yǎng)基的初始碳源消耗完以后才開始流加，甘油做碳源的時候我沒有測過培養(yǎng)基的碳源濃度，但是葡萄糖做碳源時候，斐林試劑滴定法測碳源濃度發(fā)現(xiàn)葡萄糖濃度較低，我的溶氧是由碳源流加速度控制的，溶氧濃度在30~60％。 乙酸的確抑制大腸桿菌生長，但是乙酸合成原因是什么?我一直懷疑是種子或溶氧的問題，造成乙酸的合成，進(jìn)而抑制大腸桿菌生長，因為1）我們的甘油種子是保存在-20℃;2）很多文獻(xiàn)包括論壇上都說要通入高濃度氧，而我從來沒有用過。 現(xiàn)象： 不管培養(yǎng)基、發(fā)酵工藝是什么樣，每次菌長到0D600=30，就開始增長速度極慢（期間沒有加任何誘導(dǎo)劑哦）；盡管發(fā)酵液離心后沉淀量一直增加，但是OD600的吸光值變化不大，甚至有所降低； 發(fā)酵液粘度增加，泡沫較大； 碳源一直在消耗，但是生物量不增加，產(chǎn)酸量大（因為消耗氨水量大）； 離心后，菌泥呈兩種顏色，下層為乳白色（顏色稍稍淡黃，健康大腸桿菌顏色），上層顏色較深。 遂請問各位達(dá)人，上述現(xiàn)象原因為何？如何解決這些問題？不通入高濃度氧時候，OD最高能到多少（請生產(chǎn)PHB和PHA的朋友忽略這個問題）？ [ Last edited by hanjun80 on 2012-12-10 at 05:43 ] |
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 高密度發(fā)酵 |
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zhaodahe
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
rainwander: 金幣+1, 鼓勵交流 2012-12-10 08:29:11
hanjun80: 金幣+2, ★★★很有幫助, 謝謝，同是大腸桿菌BL21(DE3)菌株，有些就木有這個現(xiàn)象 2012-12-10 12:01:53
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樓主也做過PHA吧。粘度增加有可能是胞外多糖的積累，也可能是菌體自溶；我也在做有機酸，覺得過量積累會抑制菌體生長，正準(zhǔn)備做敲除，但是不是大腸。另一個抑制產(chǎn)酸的方法是降低并嚴(yán)格控制碳源的濃度。 [ 發(fā)自手機版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
2樓2012-12-10 08:07:31
m_rna
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zcqh27
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