 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 5359 | 回復(fù): 15 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
[求助]
求助大腸桿菌發(fā)酵問題 已有1人參與
|
|||
|
我們在做大腸桿菌的工程菌株發(fā)酵。以下是基本信息： 菌株為B21(DE3)； 攜帶質(zhì)粒為PTRC99Z質(zhì)粒（有外源基因）； 發(fā)酵罐：5L 培養(yǎng)基：多種培養(yǎng)基都試過。包括無機(jī)鹽、復(fù)合培養(yǎng)基（配方見《高細(xì)胞密度發(fā)酵技術(shù)》 李寅 等 著，化學(xué)工業(yè)出版社）。碳源用過葡萄糖以及甘油，現(xiàn)象相似。 發(fā)酵液pH:6.8，以氨水調(diào)控； 發(fā)酵罐溫度：25~30都用過，用以調(diào)節(jié)發(fā)酵初期細(xì)菌比生長速率； 發(fā)酵罐罐壓：0.06、0.04MPa以及0.02MPa都試過； 轉(zhuǎn)速：從400~900rpm都試過； 通氣量：200L/h到400L/h都試過； 通過補(bǔ)料速率，控制溶氧為30%； 用的有機(jī)氮源: 1.酵母抽提物 2.蛋白胨 3.蛋白胨+酵母抽提物; 無機(jī)氮源： 1、磷酸二氫銨； 2、硫酸銨。 至于碳源濃度,都是培養(yǎng)基的初始碳源消耗完以后才開始流加，甘油做碳源的時候我沒有測過培養(yǎng)基的碳源濃度，但是葡萄糖做碳源時候，斐林試劑滴定法測碳源濃度發(fā)現(xiàn)葡萄糖濃度較低，我的溶氧是由碳源流加速度控制的，溶氧濃度在30~60％。 乙酸的確抑制大腸桿菌生長，但是乙酸合成原因是什么?我一直懷疑是種子或溶氧的問題，造成乙酸的合成，進(jìn)而抑制大腸桿菌生長，因?yàn)?）我們的甘油種子是保存在-20℃;2）很多文獻(xiàn)包括論壇上都說要通入高濃度氧，而我從來沒有用過。 現(xiàn)象： 不管培養(yǎng)基、發(fā)酵工藝是什么樣，每次菌長到0D600=30，就開始增長速度極慢（期間沒有加任何誘導(dǎo)劑哦）；盡管發(fā)酵液離心后沉淀量一直增加，但是OD600的吸光值變化不大，甚至有所降低； 發(fā)酵液粘度增加，泡沫較大； 碳源一直在消耗，但是生物量不增加，產(chǎn)酸量大（因?yàn)橄陌彼看螅? 離心后，菌泥呈兩種顏色，下層為乳白色（顏色稍稍淡黃，健康大腸桿菌顏色），上層顏色較深。 遂請問各位達(dá)人，上述現(xiàn)象原因?yàn)楹�？如何解決這些問題？不通入高濃度氧時候，OD最高能到多少（請生產(chǎn)PHB和PHA的朋友忽略這個問題）？ [ Last edited by hanjun80 on 2012-12-10 at 05:43 ] |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 高密度發(fā)酵 |
» 猜你喜歡
考研求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
085601專碩，總分342求調(diào)劑，地區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
085601材料工程專碩求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
一志愿天津大學(xué)化學(xué)工藝專業(yè)（081702）315分求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
能源材料化學(xué)課題組招收碩士研究生8-10名
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
296求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
0703化學(xué)調(diào)劑 ，六級已過，有科研經(jīng)歷
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
268求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
材料，紡織，生物（0856、0710），化學(xué)招生啦
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
301求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 發(fā)酵大腸桿菌染噬菌體��！
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 大腸桿菌發(fā)酵優(yōu)化
已經(jīng)有22人回復(fù)
- 大腸桿菌培養(yǎng)過程中OD600相關(guān)問題？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 關(guān)于IPTG在人用藥物蛋白大腸桿菌發(fā)酵表達(dá)中的應(yīng)用問題
已經(jīng)有2人回復(fù)
- 重組大腸桿菌培養(yǎng)的問題
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 細(xì)菌發(fā)酵 求助
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 大腸桿菌培養(yǎng)問題
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 大腸桿菌能發(fā)酵蔗糖嗎？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 大腸桿菌工程菌發(fā)酵染菌問題解決方案
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 大腸桿菌細(xì)胞破碎實(shí)驗(yàn)的一些問題？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 各位做大腸桿菌發(fā)酵的朋友看過來，這到底是什么問題？
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 求助：10噸發(fā)酵罐培養(yǎng)大腸桿菌OD下降問題
已經(jīng)有22人回復(fù)
- 大腸桿菌形態(tài)問題
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 大腸桿菌的活化時間問題
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 觀察大腸桿菌形貌問題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 請教一下大腸桿菌合成氨基酸的問題
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 大腸桿菌發(fā)酵問題
已經(jīng)有28人回復(fù)
- 【求助】多管發(fā)酵法測定糞大腸桿菌疑問
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助】大腸桿菌的測定
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】菌體自溶是什么原因？
已經(jīng)有28人回復(fù)
- 【求助】檢測大腸桿菌的水樣如何保存
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】大腸桿菌BL21的問題
已經(jīng)有4人回復(fù)
9樓2013-05-24 11:13:42
zhaodahe
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 220 (大學(xué)生)
- 金幣: 1796.6
- 紅花: 7
- 帖子: 461
- 在線: 378.5小時
- 蟲號: 552612
- 注冊: 2008-04-30
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物遺傳學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
rainwander: 金幣+1, 鼓勵交流 2012-12-10 08:29:11
hanjun80: 金幣+2, ★★★很有幫助, 謝謝，同是大腸桿菌BL21(DE3)菌株，有些就木有這個現(xiàn)象 2012-12-10 12:01:53
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
rainwander: 金幣+1, 鼓勵交流 2012-12-10 08:29:11
hanjun80: 金幣+2, ★★★很有幫助, 謝謝，同是大腸桿菌BL21(DE3)菌株，有些就木有這個現(xiàn)象 2012-12-10 12:01:53
|
樓主也做過PHA吧。粘度增加有可能是胞外多糖的積累，也可能是菌體自溶；我也在做有機(jī)酸，覺得過量積累會抑制菌體生長，正準(zhǔn)備做敲除，但是不是大腸。另一個抑制產(chǎn)酸的方法是降低并嚴(yán)格控制碳源的濃度。 [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
2樓2012-12-10 08:07:31
m_rna
銀蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 22 (小學(xué)生)
- 金幣: 598.5
- 散金: 20
- 帖子: 131
- 在線: 30.3小時
- 蟲號: 1556298
- 注冊: 2011-12-29
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
3樓2012-12-10 09:58:27
4樓2012-12-10 12:01:11
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 268求調(diào)劑 +7 | 好運(yùn)連綿不絕 2026-03-12 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 070300化學(xué)319求調(diào)劑 +4 | 錦鯉0909 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)336分求調(diào)劑 +4 | zbzihdhd 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +8 | 冬十三 2026-03-15 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 08工科 320總分 求調(diào)劑 +4 | 梨花珞晚風(fēng) 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[基金申請] 國自科面上基金字體 +6 | iwuli 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0703一志愿211 285分求調(diào)劑 +5 | ly3471z 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 070303一志愿西北大學(xué)學(xué)碩310找調(diào)劑 +5 | d如愿上岸 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 26考研一志愿中國石油大學(xué)(華東)305分求調(diào)劑 +3 | 嘉年新程 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085601材料工程315分求調(diào)劑 +3 | yang_0104 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 080500，材料學(xué)碩302分求調(diào)劑學(xué)校 +4 | 初識可樂 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 【0703化學(xué)調(diào)劑】-一志愿華中師范大學(xué)-六級475 +5 | Becho359 2026-03-11 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 279求調(diào)劑 +3 | Dizzy123@ 2026-03-10 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求材料調(diào)劑 +5 | 隔壁陳先生 2026-03-12 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 26調(diào)劑/材料/英一數(shù)二/總分289/已過A區(qū)線 +6 | 步川酷紫123 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 工科，求調(diào)劑 +3 | 我887 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] （081700）化學(xué)工程與技術(shù)-298分求調(diào)劑 +12 | 11啦啦啦 2026-03-11 | 35/1750 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +5 | 一定有學(xué)上- 2026-03-12 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料專碩350 求調(diào)劑 +4 | 王金科 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考博] 26讀博 +4 | Rui135246 2026-03-12 | 10/500 |
|