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打算做qpcr 遇到一些問題 希望大家看一看 已有3人參與
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我有五個基因，如果我用一個模板這樣去做qpcr。我不太懂溶解曲線和擴(kuò)增曲線的原理。 所以我是每次做一個基因，跑一次能同時得到溶解曲線和擴(kuò)增曲線？還是能夠五個基因一起跑。 我不知道溶解曲線和擴(kuò)增曲線是分別跑出來的還是一次跑出來的。 機(jī)子是abi7500。用的syber green takara的。 |
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2樓2014-11-05 13:14:59
wxk19960113
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【答案】應(yīng)助回帖
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王丹523(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2014-11-08 20:02:46
王丹523(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2014-11-08 20:02:46
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我說的是一個孔的情況。 因?yàn)槟阌玫氖莝yber green，而它的原理是只要有DNA復(fù)制就算一個擴(kuò)增，所以是分不出來5個的。。如果要同時測5個基因就需要用不同探針，根據(jù)不同通道來查看。 而熔解曲線是專門為syber green做的，因?yàn)闆]有探針那么準(zhǔn)確定量，所以要查看熔解曲線以便分辨所得的是否為我們需要的產(chǎn)物。 因此不需要換探針，只需要分開5個孔分別測5個基因，上機(jī)測熔解曲線就OK了 |
6樓2014-11-05 14:33:13
7樓2014-11-05 15:11:17
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不是熔解曲線要濃度梯度，而是作標(biāo)準(zhǔn)曲線要濃度梯度。8樓2014-11-05 15:24:56
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9樓2014-11-05 15:30:06
10樓2014-11-05 15:56:19
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