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Devil_Jimmy銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
細胞突然就不長了 求細胞達人指導(dǎo)�。�！有圖 已有8人參與
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我養(yǎng)的是髓母細胞瘤細胞株，本來一直長的很好的，長的很快的，正常分瓶培養(yǎng)，基本一天就滿，最多兩天 加藥預(yù)實驗都做好了，就準備正式開始處理了，但是突然細胞就停止生長了，種六孔板后加藥后，第二天發(fā)現(xiàn)細胞幾乎沒長， 死細胞飄了不少，之后天天換液觀察兩天，細胞幾乎不生長，確切的說是長的都是死的，或者也許是死的跟長的速度相當， 反正細胞數(shù)量增加相當緩慢，實驗沒辦法繼續(xù)了， 于是換了血清，配置了新的培養(yǎng)液，重新復(fù)蘇細胞養(yǎng)，但是奇怪的是新復(fù)蘇的細胞只有很少部分貼壁，換液培養(yǎng)好幾天也是幾乎不見生長， 繼續(xù)復(fù)蘇4瓶細胞，情況相同，是在頭疼，找不到原因， 有一點值得提的是，自從前幾天加藥后，就發(fā)現(xiàn)死去的細胞都會被一種類似黑色液滴的東西附著，原以為是加進去的藥物分子， 但是現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)，我重新復(fù)蘇的細胞沒有加藥，也是如此， 實驗已經(jīng)耽誤一個星期了，細胞還是不見好轉(zhuǎn)，郁悶死 今天拍了圖片，請各位大哥大姐大神幫忙分析下，出點主意 圖像1.jpg 圖像2.jpg 圖像3.jpg 圖像4.jpg |
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2樓2014-11-08 13:34:05
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不能天天換液，細胞本身要分泌一種生長因子的，你天天換液的話，細胞會長得很慢。你這個樣子可能是污染了吧，至于是什么污染我就不清楚了，你可以把你的耗材都滅菌啥的，重新養(yǎng)養(yǎng)試試。還有你培養(yǎng)基還和以前一樣嗎？同一種培養(yǎng)基不同廠家也會有很大影響的，我前幾天就是這樣的，現(xiàn)在一直沒養(yǎng)細胞。同一種培養(yǎng)基不同廠家培養(yǎng)基會有很大差別的。我前幾天用的是Corning的DMEM，然后直接換成Hyclone，然后細胞直接不長了，但是我以前試過直接換成Gibco的，長得也挺好的。 還有就是培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分了，比如糖、丙酮酸鈉，谷氨酰胺之類的，都是要注意的。 |
3樓2014-11-08 15:16:32
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| 細胞生長不好原因很多：你還是按照你原來狀態(tài)好的時候的條件（血清 胰酶 培養(yǎng)基 ）來養(yǎng)，其次注意你的瓶子 槍頭 。你這個變化這么突然，懷疑你是加錯什么東西了。而且你基本沒說你對那株長勢很好的細胞做了什么，你自己好好回憶反思，這才是關(guān)鍵。另外你這個細胞形態(tài)變了嗎？如果變了 直接用于改善現(xiàn)在養(yǎng)的條件做試驗品 不要做正規(guī)實驗了，已經(jīng)不是原來的細胞了，得到的結(jié)果也會有出入的。 |
6樓2014-11-09 21:27:30
Devil_Jimmy
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7樓2014-11-10 14:24:34
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8樓2014-11-10 14:46:25
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，要把她當孩子養(yǎng)著，愛他們��！哈哈 9樓2014-11-10 20:02:16
Devil_Jimmy
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我的細胞也終于活過來了。 今天又發(fā)現(xiàn)新的問題，堪稱神奇的現(xiàn)象啊，我細胞種六孔板后長的太密集了，我準備胰酶消化后分成兩份，可以種兩個板，但是奇怪的是，我加入胰酶后，細胞直接裂解掉了，郁悶死了，問了實驗室的老師，他說從來沒遇到過這樣的情況，實在想不明白，網(wǎng)上查也沒有類似的消息。 我用同樣的胰酶消化6個孔，第一個空是沒問題的，其他5個孔有一個孔是一部分裂解了，一部分消化后飄起來了，其他孔都直接裂解了，過來一會幾乎細胞輪廓都沒有了，只能看見星星點點的殘留的黑點， 我懷疑是胰酶的問題，于是消化了另外的一瓶細胞，也沒出現(xiàn)問題， 不知道前輩有沒有類似的經(jīng)驗？希望能解釋下 一瓶胰酶分裝后，-20度保存，每次用的時候拿出一瓶，現(xiàn)在都快用完了，應(yīng)該不是胰酶的問題吧 |
10樓2014-11-13 15:00:10
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