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[交流]
限制性內(nèi)切酶問題 已有4人參與
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| 我想問下 XhoI和KpnI-HF 這兩個(gè)酶好用嗎？我是把目的片段連接到載體上。目的片段P出來(lái)?xiàng)l帶很亮，回收，雙酶切，連接，轉(zhuǎn)化，涂板，有20-30個(gè)單菌落。但是菌P,都是空載，陽(yáng)性的P出來(lái)了，想問下哪里出了問題。 |
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2樓2014-11-18 16:25:19
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5樓2014-11-27 20:31:48
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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1.片段酶切時(shí)間得久一點(diǎn)，我們都是6個(gè)小時(shí)左右，然后再純化，連接 2.如果你用的是Taq酶的話可以直接做個(gè)TA cloning，這個(gè)很方便，你的片段不需要酶切就可以直接和T載體連接了，成功后再?gòu)馁|(zhì)粒上將你的片段給切下來(lái)就行了。如果用的不是taq酶的話，載體可以用平端的。 3.現(xiàn)在我們?cè)诳寺《加脽o(wú)縫克隆了，個(gè)人覺得比酶切呀什么的方便多了，PCR結(jié)束后直接純化，重組，半個(gè)小時(shí)搞定，很快，效率又高。 4.加油。 |
6樓2014-11-28 00:29:32
7樓2014-11-28 14:38:31
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