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ggyy0911鐵蟲 (正式寫手)
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[求助]
打算在N端加His標(biāo)簽，求個人幫著看看引物設(shè)計~急啊 已有4人參與
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因為3‘端用的NotI，保護堿基和酶切位點都太長，再加上His標(biāo)簽引物長度都58了，所以打算把His標(biāo)簽挪到5’端上去。 5‘端用EcoRI酶切位點，我的引物序列是AAG ACA TGC CCA AAG GTG AAG，21個 EcoRI用CCG作保護堿基，GAATTC酶切位點，還得再加個起始密碼子ATG，然后掛His標(biāo)簽CATCATCACCATCACCAT 所以最后上游引物應(yīng)該是5’-3’ CCGGAATTCATG CATCATCACCATCACCAT AAGACATGCCCAAAGGTGAAG=51個，所有的密碼子都是正向?qū)懀挥梅聪蚧パa的寫。 51個��！ 如果我把真正的引物序列減短一些呢，減到18個左右行不行�；蛘咔蟠蠹医o點建議吧。 還有N端如果加標(biāo)簽的話，據(jù)說會有不一定能表達完的蛋白，這樣上柱子的時候，這些雜蛋白也會掛上去。但在C端就可以保證蛋白是表達完整的。 |
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3樓2014-11-22 00:34:53
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4樓2014-11-22 08:24:41
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