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1樓 2014-11-24 20:59:14

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ixiaoye2012

金蟲(chóng) (小有名氣)

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luchao507(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-11-25 13:13:35

Tm42

，這種結(jié)果也能信？給你個(gè)建議做一下降落PCR

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就算大雨將整座城市顛倒，我也會(huì)給你擁抱

4樓2014-11-25 11:37:09

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航帆

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luchao507: 金幣+5, ★★★很有幫助 2014-11-24 21:20:38

有時(shí)候?qū)嶒?yàn)是個(gè)人品積累的過(guò)程……等人品攢夠了，或許就出來(lái)了

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2樓2014-11-24 21:19:13

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纖纖陌上塵

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luchao507(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-11-26 10:16:09

我之前一直擴(kuò)不出來(lái)，直到后來(lái)25ul體系中加了1ulDMSO，屢試不爽

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8樓2014-11-25 16:10:31

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dulei

木蟲(chóng) (小有名氣)

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luchao507: 金幣+3 2014-11-25 21:19:50

PCR對(duì)于退火溫度的依賴性特別小，只要不是過(guò)高的Tm值，上下范圍差個(gè)10度都能P出了，所以梯度PCR對(duì)于目標(biāo)條帶影響不大（會(huì)有“亮暗”的小區(qū)別，不會(huì)引起目標(biāo)條帶“有無(wú)”的區(qū)別）。

你這種情況，模板可能加的過(guò)多了，你把模板稀釋10-30倍后，再做PCR。同時(shí)循環(huán)數(shù)，加到35-40。
試試。

或者，你既然已經(jīng)P出來(lái)一管，那么就用P出來(lái)的PCR產(chǎn)物，作為模板，再進(jìn)行PCR（也就是二次PCR），肯定有目標(biāo)產(chǎn)物。

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9樓2014-11-25 20:05:40

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fuchange918

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luchao507(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-11-25 13:13:24

換酶試一下，我有一次摸索溫度用rTaq酶出了目的條帶，在重復(fù)就出不來(lái)了，換Etaq也沒(méi)出來(lái)，換LA就出了

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3樓2014-11-25 07:55:43

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zhaokexue

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做梯度PCR，絕對(duì)能出來(lái)，只要你曾經(jīng)做出來(lái)過(guò)

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5樓2014-11-25 13:36:33

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biotech_zhou

木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

待人以誠(chéng)：專(zhuān)業(yè)/專(zhuān)注/專(zhuān)心

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和四樓同樣的疑問(wèn)，贊同四樓的說(shuō)法。

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年末優(yōu)惠熒光定量pcr、WB、ELISA技術(shù)服務(wù)一律六折！交流錘煉知識(shí)，用心構(gòu)筑橋梁，以更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品及技術(shù)服務(wù)助力科研；QQ：2513165427；Email：b

6樓2014-11-25 14:54:56

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愛(ài)睡豬

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42°酶起作用了么

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ControlMyself

7樓2014-11-25 15:05:05

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utryer

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cDNA模板不一樣了，降解了。

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10樓2014-11-25 20:42:32

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