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西紅柿番茄面金蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助：活性污泥胞外聚合物提取 已有2人參與
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| 本人大三，申請了一個實驗項目。老師給的是做活性污泥胞外聚合物方面的實驗。自己查了挺多文獻(xiàn)的，提取實驗也做了，但提取出來的量非常少，而且只是提取液，自己以為能提取出固體的聚合物�，F(xiàn)在求助各位有經(jīng)驗的前輩傳授一下經(jīng)驗，有沒有比較完美的提取方法，最后提取出來的聚合物可不可以是固態(tài)的，提取的量怎么樣？？不勝感激�。� |
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fei763
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2樓2014-12-01 09:49:48
李杰0825
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gaofeng925: 金幣+2, 積極應(yīng)助 2014-12-02 08:07:09
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| (1)胞外聚合物的提取 胞外聚合物（Extracelluler Polymer Substances, EPS）與細(xì)胞結(jié)合緊密，需要特定的方法才能將其從污泥中分離提出。在本實驗中采用Frølund等人的方法來提取活性污泥表面的胞外聚合物。 首先，從反應(yīng)器中取50mL活性污泥樣品，在2000g、室溫下離心15min后倒出上清液。離心后再向留在離心管內(nèi)的生物體加入由526mg•L-1 NaCl，74.56mg•L-1KCl，760.2mg•L-1Na3PO4和552mg•L-1NaH2PO4組成的磷酸鹽緩沖溶液，使之再次呈懸浮液態(tài)。再將懸浮污泥樣品移入燒杯中，在其中加入90g•gMLVSS-1的離子交換樹脂（732陽離子交換樹脂）并以600rpm轉(zhuǎn)速攪拌2h，使之混合。混合后再于4000g離心300min以去除樹脂和生物體，上清液則為EPS提取液。 (2)胞外聚合物的分析方法 EPS提取物中主要是多糖、蛋白質(zhì)和DNA。多糖的測定采用蒽酮—H2SO4比色法。即高溫下糖類會被H2SO4脫水生成糠醛或糠醛衍生物，并與蒽酮（C14H10O）縮合成藍(lán)色化合物，在620nm處測定吸光度（721型分光光度計），以葡萄糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線可換算出多糖的含量。 蛋白質(zhì)采用紫外吸收法測定，同時測定260nm和280nm處的吸光度，利用下式計算蛋白質(zhì)的濃度(mg•mL-1)：ρ蛋白質(zhì)=1.45×A280nm-0.74×A260nm，該方法可消除樣品中和算對測定值的干擾。EPS的含量最終以單位質(zhì)量MLVSS中各成分的總量計。 DNA的測定采用修正的Brunk方法，主要試劑為：用100 mM NaCl中配制0.2 ppm DAPI試劑 (4, 6-二咪基-2-苯基吲哚)，10 mM EDTA，10 mM TRIS，pH 7。步驟: 將100 μL的 EPS 提取液用吸液管裝入試管中并加入2.5 ml上述試劑。直接測定樣品（激發(fā)波長360nm、發(fā)射波長450 nm），Salmon實驗采用標(biāo)準(zhǔn)方法。 |
3樓2014-12-01 10:12:16
西紅柿番茄面
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