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尹框筆記木蟲 (小有名氣)
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從發(fā)酵液中提取胞外蛋白 已有3人參與
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1、目的是要從發(fā)酵液當(dāng)中提取根霉表達(dá)的胞外蛋白，采用的是硫酸銨沉淀的方法，95%的飽和度： 按理說，硫酸銨在水中的溶解度很大的，雖說95%飽和度是比較高，但是慢慢溶解的話，最后還是會完全融掉的，但是這次到最后下面卻還有好多沒能溶解，難道說培養(yǎng)基中的配方對最后的硫酸銨沉淀有影響嗎？ 配方當(dāng)中無機(jī)鹽就是磷酸氫二鉀和七水合硫酸鎂，其他的都是有機(jī)物質(zhì)，此疑問一； 2、還是在用95%飽和度的硫酸銨沉淀蛋白當(dāng)中出現(xiàn)的問題： 在加入硫酸銨的過程中，發(fā)酵液中會出現(xiàn)一些粘粘的、棕色的東西，并且會粘在壁上，后來用手一摸就感覺是油脂類的東西，而且加硫酸銨到最后，這類物質(zhì)會和蛋白質(zhì)結(jié)合到一塊，這樣會減少蛋白量。而我要提取發(fā)酵液當(dāng)中的胞外蛋白，所以全部的蛋白都要，所以大家有方法能去除這類油脂性物質(zhì)嗎？此疑問二； 3、采用硫酸銨沉淀時，不管轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)的怎么慢，硫酸銨每次加的怎么少，在發(fā)酵液的上面還是會出現(xiàn)一些白色的物質(zhì)，師姐說這是蛋白變性了，那我應(yīng)該怎么辦才能避免出現(xiàn)這樣的情況呢？還有如果這些是變性了的蛋白，硫酸銨加到最后還會復(fù)性嗎？這對后續(xù)步驟會有多大的影響？此疑問三。 |
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