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yuer_新蟲 (初入文壇)
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[求助]
真菌發(fā)酵液離心后無法過膜 怎么辦
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真菌發(fā)酵液離心后無法過膜 怎么辦？我做的是真菌的發(fā)酵，目標(biāo)產(chǎn)物是直接分泌胞外的，查了相關(guān)文獻(xiàn)也是離心后過0.45的膜后直接上的液相。 但是，我的發(fā)酵液十分黏稠 10000rpm離心15min后還是過不了膜，甚至稀釋10倍后阻力還是很大。試過加乙醇、甲醇沉淀 蛋白多糖，但是處理后產(chǎn)物基本就檢測(cè)不到了。求助各位大俠啊。。 |
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2樓2013-10-06 09:37:16
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| 我分離過真菌胞外產(chǎn)物，用的方法與你不同，你是直接對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行測(cè)定，我是將產(chǎn)物提取出來在進(jìn)行分析，過程是這樣的：發(fā)酵液加氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至12.5，超聲3min，10000 rpm高速離心，上清液用冰乙醇4攝氏度沉淀12h，底部沉淀物即為胞外產(chǎn)物，5000 rpm離心獲得產(chǎn)物，凍干后保存干燥樣品用于后續(xù)分析。不知對(duì)于你的菌株適用不適用。 |
3樓2013-10-06 09:53:04
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yuer_: 金幣+20, ★★★★★最佳答案, 恩 我的是250ml的搖瓶 回頭試一下萃取 2013-10-07 18:17:49
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yuer_: 金幣+20, ★★★★★最佳答案, 恩 我的是250ml的搖瓶 回頭試一下萃取 2013-10-07 18:17:49
| 你做的跟我做的基本一樣，不同的是，我真菌發(fā)酵液都是120L，也是分離次級(jí)代謝產(chǎn)物，你的我估計(jì)是試管級(jí)吧，（因?yàn)槭俏⑸锇鍓K ，呵呵）看你的實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)產(chǎn)物不是很明確， 我們的方法就是用乙酸乙酯與發(fā)酵液等體積萃取三次，將你的目標(biāo)產(chǎn)物萃取到乙酸乙酯相里去，這樣你就很容易將乙酸乙酯旋蒸蒸干，然后用甲醇或者乙腈溶解，然后過膜上液相唄。。。。多糖 蛋白質(zhì)等大極性物質(zhì)是不會(huì)萃取到有機(jī)相里的，希望可以幫到你。。。。。。。。。。。。。。。。。。 |
6樓2013-10-07 16:32:52
7樓2013-10-08 10:47:53
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8樓2013-10-09 14:23:39
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