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從發(fā)酵液中提取胞外蛋白 已有3人參與
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1、目的是要從發(fā)酵液當(dāng)中提取根霉表達(dá)的胞外蛋白,采用的是硫酸銨沉淀的方法,95%的飽和度: 按理說,硫酸銨在水中的溶解度很大的,雖說95%飽和度是比較高,但是慢慢溶解的話,最后還是會(huì)完全融掉的,但是這次到最后下面卻還有好多沒能溶解,難道說培養(yǎng)基中的配方對(duì)最后的硫酸銨沉淀有影響嗎? 配方當(dāng)中無機(jī)鹽就是磷酸氫二鉀和七水合硫酸鎂,其他的都是有機(jī)物質(zhì),此疑問一; 2、還是在用95%飽和度的硫酸銨沉淀蛋白當(dāng)中出現(xiàn)的問題: 在加入硫酸銨的過程中,發(fā)酵液中會(huì)出現(xiàn)一些粘粘的、棕色的東西,并且會(huì)粘在壁上,后來用手一摸就感覺是油脂類的東西,而且加硫酸銨到最后,這類物質(zhì)會(huì)和蛋白質(zhì)結(jié)合到一塊,這樣會(huì)減少蛋白量。而我要提取發(fā)酵液當(dāng)中的胞外蛋白,所以全部的蛋白都要,所以大家有方法能去除這類油脂性物質(zhì)嗎?此疑問二; 3、采用硫酸銨沉淀時(shí),不管轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)的怎么慢,硫酸銨每次加的怎么少,在發(fā)酵液的上面還是會(huì)出現(xiàn)一些白色的物質(zhì),師姐說這是蛋白變性了,那我應(yīng)該怎么辦才能避免出現(xiàn)這樣的情況呢?還有如果這些是變性了的蛋白,硫酸銨加到最后還會(huì)復(fù)性嗎?這對(duì)后續(xù)步驟會(huì)有多大的影響?此疑問三。 |
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